杀灭鱼类指环虫天然植物药的筛选及其活性部位和活性成分研究

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【目的】寻找杀灭鱼类指环虫杀虫活性较高的植物源药物,并进行其活性部位的筛选、杀虫活性成分的初步跟踪、分离和鉴定。   【方法]1.对20种植物进行杀灭指环虫的效果实验,确定杀虫活性较高、对鱼相对比较安全、且用量也相对较低的独活作为进一步的研究对象。   2.制备感染指环虫的金鱼模型。分别用石油醚、乙酸乙酯、丙酮、乙醇提取独活的有效成分,并检测其杀灭指环虫的生物活性。根据其杀虫效果来确定最佳的活性部位。   3.采用柱层析分离结合活性跟踪的方法,通过并结合物理常数、薄层色谱(TLC)、气相色谱-质谱(GC-MS)、一般化学定性实验等对其进行分类鉴定。   [结果】1.在20种植物中,对指环虫的最高杀灭率依次为:独活为100%;除虫菊为90%;两面针、木通、苦树皮为80%;走马芹、半边莲、吐根、委陵菜为50%;草果、延胡索、藜芦、断肠草、白芷、山柰为30%-10%:在1000mg.L-1范围内,大风子、相思子、仙茅、水黄连、雷打草、瓜蒌没有明显杀虫活性。   最佳杀虫浓度从低到高依次为:木通为30mg.L-1;独活为120mg.L-1;白芷为150mg.L-1;走马芹为200mg.L-1;除虫菊为240mg.L-1;两面针为350mg.L-1;藜芦为400mg.L-1;苦树皮为500mg.L-1;延胡索为600mg.L-1;草果为700mg.L-1;山柰、断肠草、半边莲、吐根为800mg.L-1。在测试浓度范围内,能够导致试验金鱼在48h死亡的如表2-2所示,其中相思子、瓜萎、断肠草、半边莲、吐根、委陵菜在1000mg.L-1时,试验金鱼仍然未见有死亡现象。   2.独活杀灭指环虫活性部位:乙醇提取物的最佳杀虫浓度为120mg.L-1(按生药计),杀虫率为100%;丙酮提取物最佳杀虫浓度为70mg.L-1(按生药计),但最高杀虫率为72.0%;乙酸乙酯提取物的最佳杀虫浓度为300mg.L-1(按生药计),最高杀虫率只有64.8%;而石油醚提取物的最佳杀虫浓度为100mg.L-1(按生药计),最高杀虫率仅为49.1%。   3.根据2可知乙醇提取物对指环虫具有最佳杀灭效果。采用硅胶柱层析法,以石油醚-乙酸乙酯(40:1、30:1、20:1、10:1、5:1、2:1、1:1、0:1),乙酸乙酯-甲醇(100:1、50:1、20:1、10:1、5;1、3:1、2:1、1:1、0;1和水洗柱)作为洗脱系统,进行梯度洗脱,TLC检测,得到16个流分组A~P,经药效测定F流分和K流分组具有杀虫活性,且F流分为结晶体,TLC检测为单点。以氯仿-甲醇(50:1,25:1,10:1,9:1,8:1,7:1,5:1,3:1,2:1,1:1,甲醇和水洗柱)作为洗脱系统,对K流分组进行硅胶柱层析分离,得到11个流分组K1~K11,经药效测定K1流分组具有杀虫活性。以石油醚-乙酸乙酯(1:0、50:1、20:1、10:1、5:1、2:1、1:1、0:1、甲醇)作为洗脱系统,对K1流分进行硅胶柱层析分离,得到6个流分组K1.1~K1-6,其中经药效测定K1.1和K1.2具有杀虫活性,且K1-1为油性成分。以石油醚-氯仿(6:4、6:5、6:6、6:7、氯仿)作为洗脱系统,对K1-2进行梯度洗脱,得到4个流分组K1-2.1~K1-2-4,其中K1-2-3具有杀虫活性,且为结晶物质,TLC检测为单点。F和K1-2-3的活性测定结果显示,F48h的100%杀指环虫浓度为1.6mg.L-1;K1-2-348h在浓度为5mg.L-1时,对指环虫的杀灭率为74.4%;K1.148h在浓度为20mg.L-1时,对指环虫的杀灭率为51.9%。   【结论】通过对独活乙醇提取的活性化合物,进行熔点测定,并结合薄层色谱、气相色谱-质谱(GC-MS)、一般化学的定性实验等对其进行分类鉴定。F鉴定为蛇床子素、K1-2-3鉴定为香豆素类成分,K1-1鉴定为油性混合物成分。
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