脂肪酶(EC3.1.1.3)又称三酰甘油酰基水解酶,是一类在油水界面催化三酸甘油脂形成甘油和游离脂肪酸的水解酶。此外,脂肪酶还能催化水解和合成其他的一些脂类以及催化氨解、交换、酯转、醇解反应等多种化学反应。脂肪酶由于具有独特的催化特性,在食品、洗涤剂、化妆品、有机合成、制药等行业的应用越来越广泛。本研究中脂肪酶基因来自于变形杆菌属的一个菌株,将其命名为LipA,大小为864bp,编码287个氨基酸。实验结果如下：1.表达载体构建以质粒pPIC9k-LipA为模板,PCR扩增LipA。质粒pHBM905A和pHBM905BDM分别经限制性内切酶处理后与LipA片段连接,得到重组质粒pHBM905A-LipA和pHBM905BDM-LipA。2.重组毕赤酵母GS115转化及表型筛选重组质粒经Sall线性化后转化用PEG1000法制备的毕赤酵母GS115感受态细胞。通过含有橄榄油和罗丹明B的平板筛选得到阳性转化菌株。3.重组GS115菌株诱导及SDS-PAGE检测脂肪酶基因的表达从每个平板上随机挑取三个菌株每种接种至BMGY培养基,离心收集细胞并用BMMY培养基重悬,进行诱导。对诱导上清进行SDS-PAGE检测分析,其中AL菌株(重组表达载体pHBM905A-LipA转化菌株)在摇瓶发酵中的最大表达量分别可以达到60.01mg/L、64.97mg/L、58.13mg/L, BL菌株(重组表达载体pHBM905BDM-LipA的转化菌株)在摇瓶发酵中的最大表达量分别可以达到156.99mg/L、149.14mg/L、180.88mg/L。在相同的培养条件和同样的菌落密度下,BL菌株的表达量可以达到AL菌株表达量的2倍以上,研究结果表明通过对载体启动子及信号肽的优化可以提高该脂肪酶基因在毕赤酵母中的表达水平。