论文部分内容阅读
多能诱导干细胞（iPSCs）的发现引起再生医学的关注，由于IPS细胞能自我更新并能分化为多种类型的细胞,从而成为躯体的一种潜在的无限细胞来源。有研究表明iPSCs可分化为牙髓干细胞和间充质干细胞。因此，iPS细胞可以为牙缺失后的再生研究提供一条新的途径。 BMP4在骨骼和软骨的发育过程中有促进作用。在人类的胚胎发育过程中BMP4是胚胎早期分化过程中一个重要的信号分子，牙齿的形成依赖于BMP4的表达以诱导转录因子从而使牙胚发育成牙。在本课题中，通过构建过表达骨形态发生蛋白-4（BMP4）基因的慢病毒载体，观察过表达BMP4与小鼠诱导性多能干细胞生物学活性之间的关系，从而对iPSCs是否能够为牙齿缺失再生提供有效的细胞来源进行研究，为进一步的临床应用奠定基础。 方法： 采用慢病毒转染建立稳定过表达BMP4的iPS细胞株（BMP4过表达组），以未作任何转染的细胞为空白组，转染慢病毒呈阴性对照组的细胞为空载体组。CCK8检测细胞增殖活性，ALP活性检测细胞分化程度，荧光定量聚合酶链反应检测骨形态发生蛋白-4、成釉细胞蛋白、角细胞蛋白-14、牙本质唾液酸焦磷酸蛋白、骨唾液酸蛋白、Runt相关转录因子2 mRNA表达。上述六种蛋白是干细胞向牙向转化的特异性指标。 结果： 与空白组及空载体组相比，BMP4过表达组的mRNA表达、细胞增殖活性及ALP活性均明显升高（P＜0.05）。过表达BMP4组Runx2的mRNA表达水平显著增高（P＜0.001）。过表达BMP4组的AMBN mRNA相对表达水平为4.473±0.456，是空载体组的1.435倍（P＜0.001）。过表达BMP4组的CK14mRNA相对表达量是空载体组1.79倍（P＜0.001）；DSPPmRNA的相对表达量在过表达BMP4组中为53.196±11.225，是空载体组的14.942倍；过表达组BSPmRNA的相对表达量27.013±4.235，是空载体组的5.581倍，显著促进了AMBN、CK14、DSPP、BSP、Runx2 mRNA的表达。 结论： BMP4能够促进iPS细胞的细胞增殖活性及牙向分化能力。