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目的通过探讨小鼠肝癌细胞（Hepa1-6）诱导小鼠细胞毒性T淋巴细胞（CTLL-2）发生内质网应激（Endoplasmic reticulum stress,ERS）,以期明确内质网应激通过PERK-CHOP通路引起细胞耗竭,以及茶多酚逆转细胞耗竭的机制,为肝癌的治疗奠定基础。方法1 CTLL-2细胞与Hepa1-6细胞共培养后,提取蛋白,Western Blot检测GRP78和抑制性分子程序性细胞死亡蛋白1（PD-1）、粘蛋白结构域3（TIM-3）的表达;收集共培养后的细胞上清,ELISA检测细胞穿孔素（PRF1）和颗粒酶B（Gzm B）的分泌情况;收集上述共培养后的细胞,透射电镜观察CTLL-2细胞内质网形态变化情况。2内质网应激抑制剂4-苯基丁酸（4-PBA）或内质网应激激活剂衣霉素（TM）作用CTLL-2细胞后,提取蛋白,Western Blot检测PD-1、TIM-3的表达情况;收集上清,ELISA检测PRF1和Gzm B的含量。3 sh-RNA干扰CHOP或GSK2656157抑制PERK后,检测CTLL-2细胞内质网应激及细胞功能变化情况。4茶多酚处理CTLL-2细胞,Western Blot及ELISA检测内质网应激相关蛋白和PD-1、TIM-3及PRF1、Gzm B的表达情况;透射电镜观察茶多酚作用后CTLL-2细胞内质网形态变化情况。5采用单因素方差分析统计数据,利用SPSS21.0软件分析数据,以P＜0.05表示差异有统计学意义。结果1 CTLL-2细胞与肝癌细胞共培养48h后,Western Blot检测GRP78、PD-1及TIM-3表达明显增加（P＜0.001）;同时,CTLL-2细胞内质网发生明显肿胀;ELISA检测PRF1和Gzm B水平明显降低（P＜0.001）。2应用4μM TM刺激CTLL-2细胞24h,Western Blot检测发现PD-1、TIM-3表达水平显著增高（P＜0.001）;ELISA检测PRF1和Gzm B分泌水平显著降低（P＜0.001）。而当0.4m M 4-PBA处理后,与TM的结果相反。3经0.25μg/μL sh-CHOP或100 n M PERK抑制剂GSK2656157处理24h之后,Western Blot检测内质网应激相关蛋白、PD-1和TIM-3表达水平显著下降（P＜0.001）;ELISA检测PRF1和Gzm B水平显著升高（P＜0.001）;细胞内质网的肿胀明显改善。4茶多酚作用于CTLL-2细胞24h后,Western Blot检测GRP78、P-PERK、CHOP和PD-1、TIM-3表达明显降低（P＜0.001）,PERK的表达无明显变化（P＞0.05）;ELISA检测PRF1和Gzm B分泌水平明显增加（P＜0.001）;透射电镜观察CTLL-2细胞内质网肿胀明显改善。结论1肝癌细胞通过内质网应激PERK-CHOP途径诱导了CTL细胞耗竭的发生。2茶多酚通过抑制内质网应激逆转了CTL的耗竭状态。图 27 幅;表 3 个;参 198 篇。