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目的:健脾化湿颗粒是从临床汤剂发展演化而来,健脾化湿汤对脾虚型肠易激综合征的疗效显著。本课题的目的是评价健脾化湿颗粒的疗效,并在此基础上从其改善模型大鼠的血浆中胃动素(MTL)、局部肠组织中一氧化氮合成酶(NOS)、NO的含量的角度探讨中药的作用机理,比较系统地揭示健脾化湿颗粒的作用特点。方法:1.健脾化湿颗粒的制备采用水低温动态提取、冰冻浓缩、喷雾干燥和干法制粒等现代提取制备工艺。2.脾虚型肠易激综合征大鼠模型的建立采用乔氏造模法:实验前10h禁食,自由饮水。除正常组外各组大鼠分别给予番泻叶煎剂(0.6g生药/ml)灌胃,每日一次,在灌服番泻叶煎剂后即用粗制棉绳束缚大鼠的两后肢,使之行动不便,烦躁不安,造成一定的应激刺激,持续2小时,如此2周。而正常组全程只予以水灌胃。灌胃剂量均为10ml/Kg。3.番泻叶灌胃后5小时内的稀便级的测量方法:稀便级表示稀便的程度,以稀便污染滤纸形成的污迹的大小定级,分为0、1、2、3、4、5、6、7共8个等级,统计时逐个统计每堆稀便的级数,然后将所有级数相加除以稀便的数目即稀便级。4.小肠碳末推进率的测量方法:最后一次给药90min后,各组均用5%的炭末混悬液灌胃(1ml/只),30min后处死大鼠,剖取大鼠小肠,分别测量小肠碳末推进百分率。计算公式为:推进百分率(%)=幽门至碳末前沿的距离/幽门至回盲部的距离×100%。5.血浆中MTL含量的测量方法:参照谢氏实验,用放射免疫法测定。第一步,血浆标本的制备:各组大鼠以碳末灌胃后,用乙醚麻醉,自腹主静脉采血,置于离心管中(试管预冷,内含30μl EDTA-Na2和30μl抑肽酶)混匀,3000p/min离心15min,取血浆于-20℃冰箱保存备用。第二步,标本测定:各项操作均按药盒说明严格进行。以放射免疫法测定标本中MTL的含量,测定结果由放射免疫γ测量仪自动计算并打印。6.结肠组织中NOS、NO含量的测量方法:用硝酸还原酶法测定。第一步,结肠标本的制备:在距肛门2cm以上取肠组织一段,立即称重,加入生理盐水制成10%的组织匀浆,离心10min(3000r/min)取上清液待测。第二步,NOS、NO含量的测定:用硝酸还原酶法进行测定,各项操作均按药盒说明严格进行。7.局部肠组织病理检查:每组随机抽取3只大鼠,取一段结肠组织做病理检查,以排除肠粘膜炎性病变。8.离体肠管标本及台氏液的制备:8.1台氏液的配制方法:分别取NaCl 8.0g、KCl 0.2g、NaHCO3 1.0g、MgCl2 0.1g、NaH2PO4 0.05g溶于800ml蒸馏水中,CaCl2 0.2g溶于200ml蒸馏水中,在将CaCl2溶液缓慢加入前面的溶液中,并不断搅拌,应用时再加入葡萄糖1.0g即可。8.2离体肠管的制备方法:最后一次给药90min后,各组均用5%的炭末混悬液灌胃(1ml/只),30min后处死大鼠,剖取大鼠小肠,在测量完小肠墨汁推进百分率后小肠中段处剪取约2cm长肠管一段,立即放入台氏液中,冲净其内容物,置入干净的台氏液中-4℃保存备用。8.3分别打开恒温水浴箱、四导生理记录仪和电脑主机的电源,预热0.5h,将离体肠管挂于拉力传感器上,浸于含10ml台氏液的浴槽内,稳定0.5h,描记其运动曲线。测量振幅,频率等指标。9.采用SPSS统计软件处理,所有测定结果用x±s表示,各组间差异的比较采用单因素方差分析。结果:1.与脾虚型肠易激综合征(IBS)模型组大鼠相比,经过2周的治疗后,健脾化湿汤组与健脾化湿颗粒组大鼠的稀便级均显著降低,小肠碳末推进率亦明显下降,其疗效优于阳性对照组,但两组间无统计学差异。2.与脾虚型IBS模型组大鼠相比,经过2周的治疗后,健脾化湿颗粒中、高剂量组大鼠的稀便级显著降低,小肠碳末推进率亦明显下降,阳性对照组和健脾化湿颗粒低剂量组的稀便级和小肠碳末推进率虽也有下降趋势,但不及健脾化湿颗粒中、高剂量组显著。3.经中、高剂量的健脾化湿颗粒治疗后的大鼠血浆MTL较模型组显著降低,与阳性对照组和低剂量组相比亦有所下降,且差异显著。健脾化湿颗粒能改善脾虚型IBS大鼠异常升高的血浆MTL水平。4.在结肠组织中NOS和NO含量的测量中,健脾化湿颗粒中、高剂量组的NOS和NO水平要明显高于模型组、阳性对照组,差异显著。健脾化湿颗粒对脾虚型IBS大鼠局部肠组织中异常的NOS和NO水平有改善作用。5.经中、高剂量的健脾化湿颗粒治疗后的脾虚型IBS大鼠离体肠管的振幅明显低于模型组;而阳性对照组虽也有下降趋势,但无统计学差异;且健脾化湿颗粒低、中、高剂量组之间在改善离体肠管振幅上存在一定的量效关系。结论:1.健脾化湿汤和健脾化湿颗粒对脾虚型IBS均有很好的治疗作用。2.健脾化湿颗粒对脾虚型IBS有很好的治疗作用,其作用机理可能是通过调节血浆中MTL、局部肠组织中的NOS和NO的水平而达到治疗目的。