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宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一,其死亡率在女性恶性肿瘤中位居第二。持续性感染高危型人类乳头瘤病毒(HPV)是宫颈癌发生的必要条件,然而单一的HPV感染并不足以诱发宫颈癌,遗传和免疫等因素也发挥了重要的作用。MicroRNAs是一类内源性非编码RNA分子,通过降解靶基因mRNA及抑制蛋白翻译在生命体的生长、发育、细胞增殖分化等生物行为中起了重要作用。研究显示,miR-218在人类多种癌症中表达异常(以下调为主),并且其异常表达与肿瘤细胞的侵袭迁移密切相关,有可能是一种潜在的肿瘤抑制因子。我们课题组前期研究发现,miR-218在宫颈癌组织中表达下调,细胞功能实验显示miR-218可明显抑制宫颈癌细胞的侵袭和迁移能力。本研究旨在检测宫颈癌患者血浆中miR-218的表达,分析miR-218与宫颈癌患者临床病理之间的关系,并观察miR-218对宫颈癌细胞体内生长的影响并探讨其可能的机制。方法1.收集2015年1月至2016年6月于广西壮族自治区人民医院妇科就诊的60例宫颈癌患者术前血浆及60例体检健康人员(对照组)血浆;荧光定量PCR检测宫颈癌患者血浆中miR-218的表达水平,分析miR-218的表达水平与临床病理之间的关系。2.构建miR-218及阴性对照(NC)慢病毒表达载体,感染宫颈癌HeLa和SiHa细胞,筛选稳定表达miR-218的细胞株,荧光显微镜下检测细胞荧光表达情况;运用流式细胞仪检测癌细胞发光效率;qRT-PCR检测转染后HeLa和SiHa细胞中miR-218的表达情况。3.选取36只BALB/c裸鼠,随机分为6组。取3组分别皮下接种miR-218、miR-218-NC及Control组HeLa细胞悬液,另外3组分别接种miR-218、miR-218-NC及ControlSiHa细胞悬液,建立移植瘤模型;成瘤后每隔3天记录裸鼠皮下移植瘤长径及短径,计算肿瘤体积大小(肿瘤体积=0.5×长径×短径2),绘制肿瘤生长曲线;4周后处死,完整剥离出肿瘤,测定肿瘤重量及终体积。4.Trizol法提取各组肿瘤组织总RNA,分别逆转录为cDNA,qRT-PCR检测各组中miR-218、Rictor及mTORmRNA的相对表达;提取各组裸鼠肿瘤组织中总蛋白,Western blot检测移植瘤中Rictor及mTOR蛋白的表达。结果1.miR-218在宫颈癌患者血浆中相对表达量低于正常对照组,分别为0.27±0.14、1(正常对照组表达量设定为1),差别具有统计学意义(P<0.05)。miR-218表达水平在淋巴结转移阳性组较阴性组低,分别为0.11±0.09、0.34±0.11,差别具有统计学意义(P<0.05)。在年龄≥50岁组、低分化组、脉管浸润阴性组、肿瘤直径>4cm组中表达量低,但无统计学差异(P>0.05)。2.成功构建miR-218慢病毒表达载体;并获得稳定表达miR-218的HeLa和SiHa细胞,转染后HeLa和SiHa细胞中miR-218的表达明显高于对照组,流式细胞仪检测荧光效率均>90%。3.各组裸鼠一般生长情况正常,4周后miR-218过表达组裸鼠皮下移植瘤的终体积及重量均明显小于miR-218-NC组和Control组,差异均有统计学意义(P<0.05),抑瘤效果明显。而对照组之间肿瘤终体积及瘤重比较,差异无统计学意义。4.两株细胞实验组裸鼠移植瘤中miR-218相对表达量明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而对照组之间miR-218的相对表达无统计学意义(P>0.05);miR-218组中Rictor、mTOR mRNA及蛋白的相对表达量均低于相应对照组,差异有统计学意义(P<0.05);对照组之间Rictor及mTOR mRNA和蛋白的表达,差异无统计学意义。结论1.宫颈癌血浆中miR-218呈低表达,且与宫颈癌患者淋巴转移密切相关;2.miR-218明显抑制宫颈癌细胞裸鼠体内移植瘤的生长;3.miR-218可能通过抑制Rictor及调控mTOR通路,参与宫颈癌的发生发展。