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目的 探讨核转录因子RelB在结直肠癌发生发展中的作用及潜在机制方法 构建低表达RelB的人结直肠癌细胞株(DLD-1-siRelB)和对照组细胞株(DLD-1-sictrl)。采用 x-Celligence 系统实时监测 DLD-1-sictrl 和 DLD-lsiRelB 细胞的生长、迁移和侵袭能力;采用CCK-8和Brdu实验检测两组细胞的增殖情况;采用流式细胞术分析两组细胞的细胞周期变化和细胞凋亡情况;采用划痕实验检测两组细胞的迁移能力;采用Transwell实验分析两组细胞的迁移和侵袭能力;应用结直肠癌组织芯片分析RelB的表达与临床病理特征之间的关系;采用Western blot法分析AKT/mTOR信号通路、细胞周期相关蛋白、MMP2、MMP9和Integrinβ-1的表达水平。结果 x-Celligence系统实时动态监测细胞生长,DLD-1-siRelB细胞生长速度明显慢于 DLD-1-sictrl 细胞(P<0.05)。CCK-8 和 Brdu 实验结果显示,DLD-1-siRelB细胞的增殖能力显著低于对照组细胞(P<0.05和P<0.001)。DLD-1-sictrl细胞周期中G0-G1、S 和 G2-M 期百分比分别为 41.69±0.41%、27.65±0.06%和 31.15±0.47%,而DLD-1-siRelB细胞的GO-G1、S和G2-M期的细胞百分比分别为57.65±0.36%,28.89±0.71%和13.16±1.30%。低表达RelB导致DLD-1细胞G0-G1期阻滞。克隆形成实验中,DLD-1-siRelB细胞形成的克隆数明显少于对照组细胞。Western blot法显示两组细胞中总AKT蛋白表达水平无明显差异,但与对照组细胞相比,DLD-1-siRelB细胞中磷酸化AKT(Thr308)和磷酸化AKT(Ser473)的表达明显减少,而AKT信号转导的负调控因子PTEN表达增加,DLD-1-siRelB细胞中磷酸化mTOR(Ser2448)和磷酸化p70S6K(Thr389)表达水平下降。在细胞周期相关蛋白检测中,DLD-1-siRelB细胞CyclinD1和CDK4蛋白表达水平均较实验组明显降低,而p27Kip1表达水平升高。在迁移侵袭实验中,采用x-Celligence系统对细胞的迁移和侵袭能力进行24 h实时动态监测,DLD-1-siRelB细胞的迁移和侵袭生长都明显慢于对照组细胞(P<0.01)。穿过Transwell小室和被Matrigel基质胶的Transwell小室的DLD-1-siRelB细胞数明显少于对照组的细胞数(P<0.01)。细胞划痕实验结果也显示,DLD-1-siRe1B细胞的迁移能力明显慢于对照组细胞。Western blotting检测结果显示,与对照组细胞相比,DLD-1-siRelB 细胞 MMP-9、MMP-2 和 Integrin β1 的蛋白表达水平下调。qRT-PCR法显示MMP2、MMP9和Integrin β1基因的mRNA表达水平均不同程度下调(P<0.05)。采用不同浓度的5-FU处理DLD-1细胞,并用x-Celligence系统实时监测细胞生长,经5-FU处理后,DLD-1-siRelB细胞和DLD-1-sictrl细胞生长速度呈剂量依赖性下降,但DLD-1-siRelB细胞的5-FU半数抑制浓度(IC50)低于对照组细胞(P<0.001)。5-FU处理后DLD-1-sictrl细胞的G0-G1、S和G2-M期的细胞百分比分别为44.43±0.44%、30.3 1 士0.70%和 25.26±0.30%,而 DLD-1-siRelB 细胞的 G0-G1、S 和G2-M 期的细胞百分比分别为 56.35±1.04%、42.94±0.70%和 0.71±0.40%。DLD-l-siRelB组细胞周期较对照组相比更明显阻滞于S期(14.05%vs.2.66%,P<0.001)。Western blot法显示,5-FU处理后的DLD-1细胞中CyclinD1的蛋白表达水平下调。采用免疫组化方法检测结直肠癌组织中RelB蛋白的表达情况。RelB的表达与肿瘤浸润深度(P=0.018)、淋巴结转移(P<0.001)、远处转移(P=0.031)和 pTNM 分期(P=0.001)呈正相关。高表达RelB组的患者OS显著短于低表达RelB组(P=0.006),RelB的表达是影响结直肠癌预后的独立危险因素。结论 1、低表达RelB抑制DLD-1细胞的生长,这与细胞增殖减慢有关,AKT/mTOR信号通路的激活受抑制和细胞周期G0-G1期阻滞是其潜在机制。2、低表达RelB抑制DLD-1细胞的迁移和侵袭,这与MMP2、MMP9和Integrin β的表达下调有关。3、低表达RelB增强了 DLD-1结肠癌细胞对5-FU的敏感性,CyclinD1的表达下调致细胞周期S期阻滞是其潜在机制。4、RelB的表达是影响结直肠癌预后的独立危险因素。