利用超薄层等电聚焦电泳进行苦瓜杂种纯度鉴定的研究

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通过提取苦瓜种子贮藏蛋白并进行电泳,筛选出适用于超薄层等电聚焦电泳(UTLIEF)的贮藏蛋白种类,建立电泳优化体系,并对几个苦瓜杂交品种进行纯度鉴定,探索基于UTLIEF的简单、快速、准确和低成本的瓜类种子纯度鉴定方法。1、提取4种苦瓜种子贮藏蛋白:球蛋白、谷蛋白、醇溶蛋白、水溶蛋白,利用UTLIEF进行筛选,分析电泳图谱。结果表明:球蛋白、谷蛋白样品盐浓度过高、有杂质,且蛋白样品发生一定程度的变性,导致电泳条带歪斜、模糊、拖尾、泳道不直。醇溶蛋白含量经测定为0.93mg/ml,达到进行UTLIEF蛋白浓度标准,但电泳图谱显示条带数量少,颜色浅,不易辨认。水溶蛋白条带整齐,数量多,泳道直,无背景,符合UTLIEF鉴定种子纯度的要求。2、通过条件优化筛选出最佳的UTLIEF条件为:聚丙烯酰胺超薄层凝胶,厚度为0.15mm;-29℃冰箱冷丙酮冷冻脱脂3次;0.1g样品加入0.3ml提取液;4℃条件下提取1.5h;上样量10μ1。3、采用种子的水溶性蛋白超薄层等电聚焦电泳与田间种植的方法对5个苦瓜杂交组合的F1种子纯度进行检验,并将结果进行一一比对,发现参试的5个组合的父母本均可找到特征蛋白质电泳谱带,而Fl均含有父母本的特征蛋白质电泳谱带;超薄层等电聚焦电泳技术鉴定的结果与田间种植鉴定的结果完全吻合,说明蛋白质超薄层等电聚焦电泳技术可作为杂交苦瓜种子纯度检验的室内快速鉴定方法。但对于遗传组成接近的品种,不易找到特征谱带。4、实验设备、药品均采用国产,部分配件使用日常材料替代,降低了成本,同时发现国产设备在质量、精度、耗材的配套齐全度方面存在不足,无法满足高精度和高通量检验。
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