论文部分内容阅读
目的:探讨miR-150对DN间充质干细胞趋化归巢的影响是否是通过靶向调控CXCR4/SDF-1信号通路实现方法:提取C57BL/6J小鼠的骨髓间充质干细胞,通过成骨,成脂诱导及表面分子鉴定建立原代骨髓间充质干细胞细胞系。Lipofectamine2000转染miR-150 mimic,miR-150 inhibit及control至原代骨髓间充质干细胞,通过RT-PCR技术检测骨髓间充质干细胞miR-150的表达情况。通过western-blot检测CXCR4和SDF-1蛋白的表达,采用生物信息学软件检测miR-150的靶基因,通过transwell实验和划痕实验检测骨髓间充质干细胞的迁移;移植已构建好的miR-150慢病毒表达载体至DN小鼠,检测小鼠的24小时尿蛋白,血糖,肾脏比重;HE染色观察肾脏的形态变化,western-blot检测肾脏指标蛋白的表达。结果:骨髓间充质干细胞CD29,CD90阳性表达(97±2.25%)、(99±0.6%),CD45呈阴性表达(17±4.5%),并且可向脂肪细胞、骨细胞分化,符合干细胞特性。DN组骨髓间充质干细胞miR-150的表达较Normal组显著降低(p﹤0.05),DN组小鼠骨髓间充质干细胞中迁移相关蛋白CXCR4和SDF-1表达均显著高于正常小鼠骨髓间充质干细胞(p﹤0.05);生物信息学研究发现CXCR4含有miR-150的结合位点,且在多个物种中呈高度保守。骨髓间充质干细胞中过表达mi R-150后CXCR4表达水平明显下降(p﹤0.05),而抑制miR-150的表达CXCR4表达显著增加(p﹤0.05);Transwell迁移实验和划痕实验发现,过表达miR-150能显著抑制骨髓间充质干细胞迁移,抑制miR-150后细胞迁移能力提高;尾静脉注射移植感染miR-150慢病毒的骨髓间充质干细胞入DN小鼠,治疗4周后,mi R-150 inhibitor-MSC组小鼠尿蛋白明显低于DN未治疗组,血糖也比DN组小鼠明显下降,肾脏指数同样比DN组有所降低(p﹤0.05),HE染色发现miR-150 inhibitor-MSC组肾脏组织病理形态学明显改善。Western-blot检测发现肾脏组织中DN组高表达CXCR4/SDF-1蛋白,miR-150 inhibitor-MSC治疗后CXCR4和SDF-1蛋白表达降低(p﹤0.05)。结论:抑制miR-150的表达会引起CXCR4表达增加,从而刺激骨髓间充质干细胞归巢,修复受损的肾脏组织。