【摘 要】
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本文提取到黑曲霉A. niger的mRNA,逆转录之后,利用软件预测和同源性分别设计得到的引物扩增并克隆GH10家族木聚糖酶基因,转入pET20b,最后在E.coliBL21 (DE3)中得到了活性木聚
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本文提取到黑曲霉A. niger的mRNA,逆转录之后,利用软件预测和同源性分别设计得到的引物扩增并克隆GH10家族木聚糖酶基因,转入pET20b,最后在E.coliBL21 (DE3)中得到了活性木聚糖酶。DNA测序结果表明,该序列为一株新木聚糖酶基因。同时分析了不同信号肽对活性的影响：软件预测(SignalP)得到的信号肽为1-19,同源性得到的信号肽为1-25；据此设计引物得到不同长度的木聚糖酶。SignalP预测得到的X3,其最适温度为35℃,X1在50℃不具活性；由同源性得到的X2和X4最适温度分别为50℃,45℃。针对蛋白X2、X3和X4酶学特性的深入研究：三种粗酶的最适pH均为5.2,pH稳定性相差不大；纯酶X3和X4的酶学特性和粗酶基本一致。因此,正确的信号肽起始是1-25位。本实验成功地从黑曲霉中获得了一种GH10木聚糖酶,并利用信号肽预测的两种方法,找到了该蛋白酶正确的信号肽位置。
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