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胎盘在提供胎儿理想的生长环境中扮演重要的角色,它不但是母体与胎儿之间营养物质和代谢产物的转运位点,而且还是抗病原的屏障,以及分泌激素、生长因子、细胞因子和其它生物活性物质的器官。反刍动物的胎盘催乳素属于生长激素/催乳素基因家族,它们由滋养外胚层双核细胞合成。胎盘催乳素的结构和生物活性在牛、绵羊和山羊上都已经进行过研究。与生长激素相比,反刍动物胎盘催乳素与垂体催乳素具有更大的结构同源性,虽然它们都能与催乳素和生长素受体结合。山羊胎盘催乳素和绵羊胎盘催乳素分子量都在23000Da,然而,牛胎盘催乳素由于糖基化的作用分子量要大(31000Da到34000Da之间)。胎盘催乳素既分泌到胎儿血液循环中也分泌到母体血液循环中。胎儿体内胎盘催乳素的浓度随妊娠的进行而逐渐增高,鉴于此,母体血液循环中的胎盘催乳素的浓度妊娠后1/3时期达到高峰并且维持较高的水平。此外,山羊和绵羊母体胎盘催乳素的浓度比牛的胎盘催乳素浓度高100~1000倍。虽然从胎盘的重量和营养看,胎盘好象起到重要的作用,但是调控胎盘催乳素分泌的确切因素尚不明确。
本实验利用来自屠宰场和剖腹产获取的胎盘和血液,通过运用普通光学显微镜和透射电子显微镜对胎盘组织中的各类细胞,尤其是滋养层单核和双核细胞进行形态的观察,达到确定细胞种类并且分析细胞相关成分的目的;通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测胎盘组织中相关蛋白质的表达情况;通过反转录.聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测胎盘组织和母体血浆中胎盘催乳素信使RNA(mRNA)。
制备小鼠抗重组山羊胎盘催乳素(rcPL)多克隆抗体,并利用此抗体在山羊胎盘中定位胎盘催乳素。用rcPL对6-8周龄的昆明小鼠进行免疫注射制备多抗,第三次加强免疫后第6天采集少许血清,用琼脂凝胶免疫扩散(AGID)和间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体的产生情况;分娩后立即通过剖腹产的方法获得山羊胎盘组织,用获得的抗血清通过免疫组织化学(IHC)和间接荧光抗体试验(IFA)的方法定位胎盘催乳素。琼脂扩散检测抗原浓度为100μg/ml,用ELISA中酶标仪检测450nm处OD值,免疫血清与阴性对照的比值P/N为7.77;IHC和IFA显示胎盘催乳素在肉阜和子叶的双核细胞及单核细胞中表达。试验结果表明,使用背部皮下多点注射的方法对昆明白小鼠进行免疫来制备重组山羊胎盘催乳素多克隆抗体是可行的,制备的抗体能满足免疫组织化学和荧光免疫组织化学检测胎盘催乳素的要求。