【摘 要】
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目的:通过Flexcell装置搭建力学模拟实验平台,开展中医(?)法样刺激对三维人骨骼肌细胞生物机械信号传导通路的研究,探索中医(?)法样刺激由力学信号转换为生物化学信号的转导途径。方法:本课题由二部分组成。第一部分:Flexcell-5000型细胞应力机械加载系统模拟中医(?)法样刺激:实现Flexcell-5000型细胞应力机械加载系统与推拿名老中医严隽陶教授的(?)法曲线相吻合。第二部分:复
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目的:通过Flexcell装置搭建力学模拟实验平台,开展中医(?)法样刺激对三维人骨骼肌细胞生物机械信号传导通路的研究,探索中医(?)法样刺激由力学信号转换为生物化学信号的转导途径。方法:本课题由二部分组成。第一部分:Flexcell-5000型细胞应力机械加载系统模拟中医(?)法样刺激:实现Flexcell-5000型细胞应力机械加载系统与推拿名老中医严隽陶教授的(?)法曲线相吻合。第二部分:复苏和培养原代人骨骼肌细胞,制作人骨骼肌细胞模型(正常、损伤)以及三维人骨骼肌细胞凝胶(正常、损伤),将凝胶分为正常组(N)、损伤组(CIG)、(?)法干预0.301Mpa组(RMGA)、(?)法干预0.603Mpa组(RMGB)、(?)法干预0.938Mpa组(RMGC),利用Flexcell-5000细胞应力机械加载系统对RMGA、RMGB、RMGC组分别进行干预,参数为:0.301MPa、0.603MPa、0.938MPa,为期3d,10min/d,频率为2Hz。(?)法干预结束之后,各组样本进行总超氧化物歧化酶活力、丙二醛指数和肌酸激酶指数检测,通过比较筛选出(?)法最优压强值。将筛选出的(?)法最优压强值分为正常组(N)、损伤组(CIG)、(?)法干预组(RMG),而后进行Hippo/Yap信号通路检测,分别将各组内的蛋白进行Western Blot检测,观察各组细胞内上游蛋白p-LATS1和下游蛋白p-Yap(Ser127)的蛋白表达情况,来探究(?)法的生物力学效应机制。结果:1.利用Flexcell-5000细胞应力加载干预系统模拟(?)法曲线,实现了对三维人骨骼肌细胞的模拟(?)法干预。2.损伤细胞与正常细胞相比,(?)法样刺激作用于损伤三维人骨骼肌细胞后,检测细胞内总超氧化物歧化酶活力(T-SOD)、肌酸激酶含量(CK)和丙二醛(MDA)含量得出:0.938Mpa(RMGC)组T-SOD活力较损伤(CIG)组上升(P<0.05)、MDA含量和CK含量较损伤(CIG)组下降(P<0.05),基本恢复至正常细胞组水平,由此筛选出适合三维人骨骼肌细胞(?)法最优压强值为0.938MPa。3.(?)法干预损伤三维人骨骼肌细胞,(?)法干预(RMG)组p-LATS1和p-Yap的相对蛋白表达量较损伤(CIG)组明显上升,差异有统计学意义(P<0.05),提示(?)法样刺激与Hippo/Yap通路有关,(?)法样刺激作用于三维人骨骼肌细胞可开启细胞增殖通路。结论:1.适合人骨骼肌损伤模型的地塞米松磷酸钠溶液终浓度为1.2m M。2.使用Flexcell-5000型细胞应力干预加载系统筛选出(?)法刺激最佳压强值为0.938Mpa。3.Hippo/Yap通路可能是手法导致所产生生物学效应的传导途径之一。
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