木质纤维素微生物降解酶系的探究与优化

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为了提高来自里氏木霉的纤维素酶降解木质纤维素的效率,我们在里氏木霉和毕赤酵母中使用异源表达技术表达并构建了复合型酶系。来自Clostridiumstercorarium的耐热纤维素内切酶Cel9a和经过热稳定性改造的里氏木霉胞内β-葡萄糖苷酶Cel1b-S在里氏木霉中分别使用XYNⅡ和CBHⅠ的启动子和信号肽序列进行了表达分泌。Cel1b-S同样在毕赤酵母GS115中得到了异源表达,经镍柱纯化后与里氏木霉纤维素酶混合,并以微晶纤维素和脱木素玉米芯等木质纤维素作为底物进行了糖化水解测试,对其纤维素降解能力进行了高效液相色谱(HPLC)测定。  为了更深层次的理解丝状真菌降解木质纤维素的机理,我们尝试对里氏木霉的胞外纤维素酶多聚体进行了纯化。我们使用凝胶过滤色谱(GFC)、疏水作用色谱(HIC)及离子交换色谱(IEC)对分离浓缩后的里氏木霉T1胞外蛋白进行纯化,并对经过纯化后的蛋白样品进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(BN PAGE)进行检测。我们将在接下来的工作中尝试使用冷冻电镜(Cryo-EM)对多聚体结构进行解析。
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