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目的:为了构建具有血管化的组织工程肝组织,本题进行了以下系列基础性研究:1、肝组织工程血管化种子细胞的制备;2、肝血管支架材料相容性及支架血管化研究;3、血管生成的微环境（细胞外基质）研究;4、血管化肝组织块的构建 方法:1.用胶原酶灌注Percoll纯化法分离肝窦内皮细胞,肺组织块贴壁法分离微血管肉皮细胞,并进行细胞的鉴定。2.将微血管内皮细胞种植在PLGA和PEG的薄膜上,评价细胞与材料相容性。将含内管网的可降解PLGA多孔支架的管道内皮化后植入小鼠肠系膜间,观察植入2周、4周后体内血管化情况。3、先在加入VEGF165的纤维蛋白立体凝胶中诱导微血管内皮细胞形成血管样结构,将形成了血管样结构的纤维蛋白凝胶用多孔塑料薄膜包裹后植入到小鼠肠系膜间,于2周取出观察凝胶血管化情况及其中的血管样结构能否能变成有血流的微血管。4、用肝窦内皮细胞对内管网多孔可降解PLGA支架的管道进行内皮化,然后在网管外被覆一层稀薄的肝细胞和纤维蛋白凝胶混合物,构建肝组织块,分别植入到剥除肝包膜的肝表面和肠系膜间,观察构建的肝组织块存活和血管化情况。5、本研究中所有细胞移植均采用性别交叉移植的方法,用FISH法检测SRY基因对外源细胞进行示踪。 结果:1.肺组织块贴壁法分离得到纯度为87.25±1.55%,存活率达98%以上的微血管内皮细胞。用胶原酶灌注Percoll纯化法能分离得到活力为95%的肝窦内皮细胞,95.8±3.39%的肝窦内皮细胞表达Ⅷ因子。2.PLGA材料与微血管内皮细胞的亲和性优于PEG,对表面的流体冲击力的耐受力强;内皮化明显增强内管网支架血管化,体外内皮化支架中的内皮细胞参与了血管化,内皮化的支架管道能与宿主血流相通;支架血管化的进程为:血窦→无平滑肌的血管→血管。3、在加入VEGF165