【摘 要】
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目的:探讨Piwil2诱导的肿瘤样干细胞（Piwil2-iCSCs）来源的差异piRNA MW557525对肾母细胞瘤细胞（G401）及Piwil2-iCSCs生物学行为的影响。方法:1通过高通量测序（HTS）筛选了Piwil2-iCSCs的差异piRNA,通过miRanda算法预测目标基因,并对靶基因进行GO和KEGG分析。2采用RT-qPCR检测G401及Piwil2-iCSCs中piRNA
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目的:探讨Piwil2诱导的肿瘤样干细胞（Piwil2-iCSCs）来源的差异piRNA MW557525对肾母细胞瘤细胞（G401）及Piwil2-iCSCs生物学行为的影响。方法:1通过高通量测序（HTS）筛选了Piwil2-iCSCs的差异piRNA,通过miRanda算法预测目标基因,并对靶基因进行GO和KEGG分析。2采用RT-qPCR检测G401及Piwil2-iCSCs中piRNA MW557525及NOP56的表达情况。3采用脂质体转染技术,将piRNA MW557525转染入肾母细胞瘤细胞株G401及Piwil2-iCSCs细胞中,并用RT-qPCR技术验证转染后G401及Piwil2-iCSCs细胞中piRNA MW557525的表达量。4 PiRNA MW557525转染后,采用CCK8检测G401及Piwil2-iCSCs细胞增殖情况,细胞凋亡能力的改变通过流式细胞术检测,划痕实验用来检测细胞迁移能力的改变,Transwell实验用来检测侵袭能力的改变。通过Western blot检测凋亡蛋白（BAX、BCL2）和侵袭相关蛋白（MMP2、MMP9）的表达。5通过双荧光素酶实验检测NOP56与piRNA MW557525的结合情况;通过Western blot和RT-qPCR检测NOP56与piRNA MW557525的相互作用。6通过Western blot检测Piwil2-iCSCs中干细胞多能性相关标志物CD24、CD133、SOX2、KLF4的表达。结果:1通过HTS,我们筛选了204个差异piRNA,miRanda预测了77个靶基因。GO分析表明,这些靶基因的生物过程（BPs）主要参与调节细胞的钙浓度,其分子功能（MFs）主要参与调节ATPase的活性。2 PiRNA MW557525在G401中表达水平显著低于HK2;在Piwil2-iCSCs中表达水平显著高于FB;其靶基因NOP56在G401及Piwil2-iCSCs中均高表达。PiRNA MW557525与NOP56非直接结合,但可间接调控NOP56的表达。3 PiRNA MW557525促进Piwil2-iCSCs增殖、迁移、侵袭及干细胞多能性并抑制细胞凋亡,而NOP56抑制Piwil2-iCSCs增殖、迁移、侵袭及干细胞多能性并诱导细胞凋亡。4 PiRNA MW557525抑制G401增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡;PiRNA MW557525抑制G401细胞MMP2、MMP9及BCL2的表达水平,促进BAX表达。结论:1 PiRNA MW557525在Piwil2-iCSCs中高表达,在G401中低表达;NOP56在Piwil2-iCSCs及肾母细胞瘤中均高表达。PiRNA MW557525可能间接调控NOP56表达。2 PiRNA MW557525促进Piwil2-iCSCs增殖、迁移、侵袭及干细胞多能性,抑制其凋亡。NOP56抑制Piwil2-iCSCs增殖、迁移、侵袭及干细胞多能性,促进其凋亡。3 PiRNA MW557525抑制G401细胞增殖、迁移、侵袭,促进其凋亡。
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