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随着对Sirtuins家族蛋白研究的不断深入,关于其功能的报道也越来越广泛。通过转录组和数字表达谱分析,我们发现家蝇在受到细菌刺激后体内Sirt1和Sirt4基因表达水平发生显著变化,提示它们可能参与家蝇免疫应答过程。本文以此为出发点对家蝇应激过程中Sirt1和Sirt4基因表达的变化规律及其可能存在的调控机制进行了研究。 本研究主要内容包括:⑴克隆了家蝇Sirt1和Sirt4基因cDNA序列,分别命名为MdSirt1和MdSirt4,并对其进行了生物信息学分析。两条基因所编码的蛋白MdSIRT和MdSIRT4各具有一段保守的SIR2保守结构域,两者氨基酸序列与其它物种中的同源蛋白之间均具有较高的同源性。⑴利用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹方法对MdSirt1和MdSirt4在家蝇不同发育时期、不同组织和应激过程中的表达量变化进行了分析。MdSirt1和MdSirt4在家蝇受到细菌刺激时分别上调和下调,同时检测到MdSIRT4在蛋白水平也发生了相似的变化。⑶MdSirt1和 MdSirt4在家蝇受到热激处理时mRNA表达量分别上调和下调,同时检测到MdSIRT4在蛋白水平也发生了相似的变化。⑷MdSirt1和MdSirt4在家蝇受到重金属影响后mRNA表达量均上调,同时检测到MdSIRT4在蛋白水平也发生了相似的变化。⑸在对MdSirt1干扰后我们发现家蝇幼虫应对细菌刺激的能力下降;而对MdSirt4进行了干扰后,我们发现家蝇核转录因子MdNF-κB表达量上升,同时检测到家蝇抗菌肽的表达量上调。