前言 肺癌是全球发病率最高的恶性肿瘤之一，而小细胞肺癌(SCLC)又在肺癌病理类型中以恶性度高，血液淋巴道转移早，预后差而著称。迄今对SCLC转移复发均无有效治疗方法。但随着科学技术的进步，人们对肺癌的发生发展和转移机制的认识已经深入到分子水平，肿瘤的发生不仅与原癌基因的激活与抑癌基因的灭活有关，而且还与细胞凋亡基因(Fas／FasL)失去正常调控有关，因此凋亡与肿瘤发生发展的关系愈来愈受到重视，但凋亡在肺癌，由其在SCLC演变过程中起什么作用如何表达目前仍不十分清楚，本实验应用免疫组化SP法检测55例SCLC组织，伴有淋巴结转移34例，癌旁正常肺组织25例中Fas／FasL基因蛋白的表达，探讨二者表达与SCLC发生发展的关系。 目的 本实验应用免疫组化SP法检测SCLC组织和转移淋巴结及癌旁正常肺组织中Fas／FasL基因蛋白的表达情况，探讨二者表达与SCLC发生发展的关系。 实验材料 1．标本：选自中国医科大学附属第一医院胸外科1999年12月-2003年4月手术切除后经病理证实的小细胞肺癌标本55例(其中燕麦细胞型26例，中间细胞型17例，混合细胞型12例)，男34例，女21例，年龄≥50岁，23例，＜50岁22例，伴有淋巴结转移者34例，另取癌旁正常肺组织25例，术前均未行放疗或化疗，标本均经中性甲醛溶液固定，石蜡包埋，制成4um切片。 2．抗体：即用型鼠／兔抗人Fas／FasL多克隆抗体及SP免疫组化染色试剂盒均为美国Maxim公司产品。实验方法 1.免疫组化染色: ①石蜡切片常规二甲苯脱蜡巧分钟(而n)，梯度酒精脱水后，蒸馏水冲洗。 ②3%过氧化氢灭活10min ③组织抗原修复，将切片放人500血工作液中置微波炉中加热后，取出室温冷却，PBS液(PH7 .4)冲洗。 ④5%正常山羊血清封闭，室温孵育10而n，倾去血清，滴加一抗4℃过夜。 ⑤将切片从冰箱中取出，PBS冲洗，滴加生物素标记二抗，37℃孵育30min。 ⑥PBS冲洗，滴加第二代生物素标记三抗，37℃孵育30min。 ⑦PBS冲洗，DAB显色剂显色，取蒸馏水0.85nil按顺序加人A，B，C各SOul混匀，取50ul滴加到切片上，显色时间15一25秒 ⑧自来水充分水洗，苏木素复染3而n，水洗，盐酸酒精分化4一5秒，充分水洗返蓝romin，二甲苯透明，梯度酒精脱水，.中性树脂封片。 2.判断标准:Fas/FasL蛋白阳性染色标准主要为细胞膜或细胞质出现棕黄色颗粒，根据肿瘤组织细胞的染色率和染色强度进行判断，弱阳性(+)浅棕黄色，肿瘤组织阳性染色细胞数为5%一25%，阳性(++)棕黄色，肿瘤组织阳性染色细胞数为25%一50%，强阳性(+++)，深棕黄色，肿瘤组织阳性染色细胞数为〕50%，阴性(一)偶有棕黄色细胞，但细胞数<5%。细胞数计数方法为按顺序查找5个以上高倍视野计数细胞数>1000个。阳性判断标准以(++)以上定为阳性。 3.统计分析:采用x，检验。线性相关分析。数据经sPssll .5软件包处理。实验结果 1.Fas/FasL蛋白表达定位于细胞浆少部分有细胞膜着色，阳性产物呈弥漫性或散在分布为粗细一致的黄色或棕黄色颗粒。/， 2.正常肺组织中Fas表达阳性率为64%明显高于sCLC组织14.6%(p<0.01)，Fas在有转移淋巴结组织中表达强度(17.6%)明显低于无转移淋巴结组织(52.4%)(p<0.05) 3.FasL在SCLC中的表达阳性率为60%明显高于正常肺组织16%(p<0.01);FasL在有转移淋巴结组织中表达阳性率55.9%明显高于无转移淋巴结组织28 .6%(p<0.01); 4.Fas/FasL在SCLC病理亚型，年龄，性别中的表达无显著差异(p>0.05) 5.线性相关分析显示Fas/FasL在SCLc中表达水平呈负相关(P<0.05)在淋巴结组织中表达水平无明显相关性。(P>0.05)结论1 .Fas/FasL参与了小细胞肺癌的发生与发展。2.Fas/FasL可能与小细胞肺癌的转移相关。