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目的:药物反应个体差异是临床用药中的常见现象,认识和阐明药物反应个体差异及其产生机制是提高药物治疗效果、安全合理用药的重要课题。药物代谢差异是造成临床药物反应差异最主要的原因。近年来的研究已证实,药物代谢学的研究成果无论对临床用药还是新药研发都具有重要意义。肝脏是药物代谢的主要器官,主要存在于肝细胞微粒体中的细胞色素P450（CYP450）是体内最重要也是大的药物代谢酶系,主要参与药物在体内的氧化代谢,同时也与致癌物、类固醇激素和脂肪酸的氧化代谢有关,现已发现200多种CYP450酶。在CYP450超家族中,CYP2是最大的家族,有15个亚家族,其中CYP2A～2E存在于哺乳动中,CYP2C是其中最大的亚家族,该亚家族中CYP2C9、CYP2C19与药物代谢关系密切。现已证实CYP2C19与几十种药物的体内代谢密切相关,主要参与药物在体内的羟化反应。由于CYP2C19活性存在显著的个体差异和种族差异,表现为遗传多态性,可使多种药物在体内的代谢产生个体差异,导致血药浓度的个体差。如果多种药物经CYP2C19代谢,同时服用这些药物,易产生相互作用,从而影响药物在体内的代谢,最终影响疗效或产生不良反应。故研究CYP2C19酶的活性及其影响因素对指导临床合理用药非常重要。本研究的目的是建立大鼠肝微粒体CYP2C19酶的体外培养体系及活性测定方法,研究大鼠肝微粒体CYP2C19酶的动力学特点及联合用药对其活性的影响,从而预测药物经CYP2C19酶代谢的过程,为进一步研究CYP2C19酶提供方法和参考依据,同时也可预测临床合并用药时药物的相互作用,防止不良药物相互作用的发生,为临床医师合理用药提供理论参考,也为理解细胞色素P450酶的机制和底物谱提供实验依据。本研究主要是以奥美拉唑为CYP2C19酶的探针药物,研究用反相高效液相法（RP-HPLC）测定大鼠肝微粒体CYP2C19酶的活性;进一步优化大鼠肝微粒体体外培养体系,测定使用不同药物后,培养体系中奥美拉唑（OMZ）及其主要代谢物5—羟基奥美拉唑（5-OHOMZ）的含量变化;反映药物对CYP2C19酶活性的影响。总结和分析经CYP2C19酶代谢的药物联合用药时应注意的问题,避免出现酶的诱导或抑制,为临床合理用药提供理论依据。方法:取雄性大鼠,体重190±10g,断头处死后,用钙盐沉淀法制备大鼠肝微粒体匀浆,置-70℃低温冰箱中保存。于冻存2、4、6个月分别取冻融的微粒体,进行蛋白质含量及CYP450酶总量测定。用正交试验设计分析法对大鼠肝微粒体CYP2C19酶的体外培养条件进行优化选择,建立大鼠肝微粒体CYP450酶系的体外培养体系;并通过选择不同的条件,对其酶动力学特性进行研究;建立CYP2C19酶活性的测定方法,采用RP-HPLC测定培养体系中奥美拉唑及其代谢产物5-羟基奥美拉唑的浓度,色谱条件:Phenomenex C8柱（4.6 mm×150mm,5μm）;岛津Shim-pack C8预柱（4.6 mm×10 mm,5μm）;流动相为乙腈-0.02mol/L磷酸（26:74,V/V）;检测波长为302 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:30℃;进样量20μL;以非那西丁作为内标物;以5-羟基奥美拉唑（5-OHOMZ）与奥美拉唑（OMZ）的比值（5-OHOMZ/OMZ）表示CYP2C19酶的活性。利用建立的培养体系及CYP2C19酶活性的测定方法,在培养体系中加入临床常用药物（化合物）,测定CYP2C19酶的活性变化,考察临床上联合用药对CYP2C19酶活性的影响。结果:采用RP-HPLC法同时测定大鼠肝微粒体CYP2C19酶培养体系中OMZ和5-OHOMZ的浓度,建立了CYP2C19酶活性的测定方法,该方法具有快捷有效的样品前处理,样品分析时间少,良好的分离度和可靠性的特点。结果显示奥美拉唑在1～15μmol/L范围内线性关系良好,5—OHOMZ在0.1～5μg/L范围内线性关系良好。利用正交试验设计分析法对体外培养条件优化选择得出的最佳培养条件是:代谢系统总体积为1 mL,其中50 mmol/L的NADPH 0.02 mL,大鼠肝微粒体蛋白混合液0.05 mL,350μmol/L的奥美拉唑0.02 mL,100 mg/L的内标非那西丁0.02 mL,加PH为7.4的磷酸盐缓冲液定容至1 mL,在37℃培养20 min。CYP2C19酶的米氏常数Km=69.16μmol/L和Vmax=11.34μmol·min-1·mL-1（培养液）,最适反应温度为37℃,培养缓冲液最适pH为7.4,该酶对pH的变化较敏感,对热极不稳定。在临床常用药物中,氯霉素、西米替丁、氧化苦参碱、紫杉醇、丹参酮ⅡA、环磷酰胺与异环磷酰胺等药物对CYP2C19酶活性具有较显著的抑制作用;而苯妥英钠、丹参素钠等药物对CYP2C19酶具有较显著的酶促作用;硝苯地平、美托洛尔,维拉帕米对CYP2C19酶活性影响不明显。结论:本研究建立的CYP2C19酶体外培养体系及活性测定的反相高效液相色谱法操作简便、灵敏、快速,可同时测定OMZ和5-OHOMZ的浓度,适合用于体内外研究药物代谢时CYP2C19酶活性的测定。通过对培养体系中的CYP2C19酶动力学特点分析可以发现CYP2C19酶活性对于pH的变化较敏感,而且对热极不稳定。临床同时应用经CYP2C19酶代谢的某些药物可对CYP2C19酶产生较显著的抑制或诱导作用,因此同时服用这些药物时应该谨慎,尽量做到用药个体化,以达到临床合理用药的目的。