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脓毒性腹膜炎是普通外科常见的一类疾病,除了及时的手术干预、充分的腹腔引流及多系统支持治疗外,如何逆转脓毒性腹膜炎中脓毒血症是治疗疾病的关键。我们发现磷酸酶Wip1缺失小鼠构建盲肠结扎穿刺模型后,预后显著改善;进一步研究证实Wip1通过维持中性粒细胞表面CXCR2的表达,增加其在腹腔内的浸润并增强病原菌清除能力;使用特异性药物抑制Wip1在中性粒细胞的表达,不仅改善小鼠脓毒性腹膜炎预后,同时也显著增强人外周血中性粒细胞在体外的趋化能力,因此我们提出抑制Wip1是治疗脓毒性腹膜炎的新策略。如何诱导长期移植免疫耐受是器官移植领域的关键问题。我们从适应性免疫细胞及固有免疫细胞两个方面入手,以调节性T细胞为基础提出利用体外扩增的抗原特异性调节性T细胞促进混合嵌合体形成,并进一步诱导小肠移植免疫耐受的策略;我们也以髓系抑制性细胞这一固有免疫细胞为基础,提出体外利用地塞米松协助诱导抑制功能及趋化能力显著增强的髓系抑制性细胞的策略,促进移植免疫耐受。固有淋巴细胞(ILC)是最新发现对黏膜免疫系统具有重要调节功能的细胞群体,寻找其与经典的T细胞不同的作用特点是阐明机体内为何存在这类数量极低的细胞群体的关键。我们创新性发现2型ILC能够分泌VEGFA,并且ILC2来源的VEGFA在黏膜免疫疾病中具有重要生物学意义,因此我们的发现为全面了解ILC及机体免疫系统提供了新的理论依据。第一部分磷酸酶Wip1调控脓毒性腹膜炎机制研究目的:揭示磷酸酶Wipi调控脓毒性腹膜炎的细胞学及分子机制。方法:运用Wip1全身敲除小鼠,构建盲肠结扎穿刺模型,检测生存率及组织脏器损伤程度;利用中性粒细胞剔除剂和过继输注实验,说明Wip1调控脓毒性腹膜炎的细胞学机制;运用流式细胞术过继输注等实验探索Wip1调控中性粒细胞趋化及功能,改善脓毒性腹膜炎预后的分子机制。结果:Wip1全身敲除小鼠盲肠结扎穿刺模型预后显著改善,并且中性粒细胞在腹腔内浸润增加,菌落负荷在腹腔及外周血显著降低;剔除中性粒细胞后,Wip1缺失对于脓毒性腹膜炎预后改善被逆转;Wip1缺失的中性粒细胞高表达CXCR2并且杀菌能力显著增强;药物抑制Wip1在中性粒细胞的表达,改善小鼠脓毒性腹膜炎预后,同时也逆转人外周血中性粒细胞在经内毒素刺激后CXCR2表达的下调,增强趋化能力。结论:磷酸酶Wip1介导中性粒细胞的趋化及病原菌清除能力,调控脓毒性腹膜炎预后;抑制Wip1是治疗脓毒性腹膜炎的新策略。第二部分调节性T细胞促进混合嵌合体形成诱导小肠移植耐受目的:探索拟以调节性T细胞(Treg)为基础诱导小肠移植耐受的策略。方法:从心脏移植耐受小鼠脾脏获取抗原特异性Treg,在体外运用IL-2、雷帕霉素及树突状细胞进行体外扩增,并检测扩增后Treg的免疫抑制功能及扩增效率;过继输注扩增后的抗原特异性Treg或普通小鼠脾脏来源的Treg,联合雷帕霉素、CTLA-4阻断剂及供者骨髓细胞输注,构建混合嵌合体,并行小肠移植,探索小肠移植物存活时间是否延长及免疫耐受相关机制。结果:抗原特异性Treg经体外扩增后,免疫抑制功能显著增强,并且能够稳定地诱导混合嵌合体的形成;诱导的混合嵌合体在行同种异体小肠移植后,能够显著延长移植物存活时间,形成抗原特异性免疫耐受;诱导耐受的分子机制包括中枢免疫耐受即同种异体反应性T细胞在胸腺的清除及外周Treg的比例在移植物及外周血的显著增加。结论:抗原特异性Treg能够促进混合嵌合体形成并诱导小肠移植耐受。第三部分地塞米松增强髓系抑制性细胞分化及功能诱导免疫耐受目的:拟探索利用髓系抑制性细胞(MDSC)诱导移植免疫耐受的策略。方法:在体外利用GM-CSF和不同浓度的地塞米松,诱导小鼠骨髓细胞分化为MDSC,检测诱导出的MDSC的免疫抑制功能;利用RT-PCR技术及iNOS敲除小鼠,探索地塞米松诱导的MDSC发挥功能的机制;过继输注地塞米松诱导的MDSC,并行心脏移植,检测心脏移植物存活时间及地塞米松诱导的MDSC延长心脏移植物存活时间的分子机制。结果:地塞米松促进MDSC的分化并且增强其免疫抑制功能,地塞米松诱导的MDSC抑制功能的发挥依赖iNOS信号通路;在体内,地塞米松诱导的MDSC通过GR受体信号通路依赖的途径上调CXCR2表达,更多地趋化到移植物内,并且促进调节性T细胞在体内的扩增,协同延长心脏移植物存活时间。结论:地塞米松诱导的MDSC依赖iNOS及GR受体信号通路延长心脏移植物存活时间。第四部分2型固有淋巴细胞分泌VEGFA及其重要生物学意义目的:探索2型固有淋巴细胞(ILC2)促进黏膜免疫疾病的新机制。方法:利用人类外周血,通过RT-PCR技术及体外IL-33、IL-2及IL-25培养人外周血ILC2,检测ILC2表达VEGFA mRNA及蛋白的能力;构建小鼠模型,检测肺部ILC2表达VEGFAmRNA及蛋白的能力,并利用VEGFA受体特异性阻断剂SU1498及过继输注实验,检测ILC2来源的VEGFA在黏膜疾病中的作用,以及VEGFA通路对于ILC2功能的影响。结果:人外周血ILC2及小鼠肺部ILC2均具备表达VEGFAmRNA及蛋白的能力,并在哮喘患者外周血ILC2内表达显著上调;VEGFA通路的阻断显著降低呼吸道炎症及气道高反应性,并且也显著降低ILC2的活化及功能。结论:ILC2来源的VEGFA不仅促进哮喘的发生发展,同时也是调控ILC2活化与功能的新机制。