【摘 要】
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目的应用RNA干扰技术抑制纤维化的肝星型细胞(CFSC)中表达增多的基质金属蛋白酶的抑制因子(TIMP-1)mRNA的表达，并探讨TIMP-1mRNA的表达下降与纤维化的肝星型细胞凋亡的关系。
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目的应用RNA干扰技术抑制纤维化的肝星型细胞(CFSC)中表达增多的基质金属蛋白酶的抑制因子(TIMP-1)mRNA的表达，并探讨TIMP-1mRNA的表达下降与纤维化的肝星型细胞凋亡的关系。方法RT-PCR获得TIMP-1cDNA，克隆于pGEM-T载体上，PCR鉴定并进行序列分析；再以pGEM-T/TIMP-1重组质粒为模板，PCR获得带有T7启动子的TIMP-1cDNA；体外转录获得TIMP-1dsRNA；用Dicer酶切TIMP-1dsRNA得到siRNA；将siRNA转染CFSC，分别在12hr、24hr和48hr收集细胞，用RT-PCR半定量检测转染后的CFSC中TIMP-1mRNA的表达，流式细胞仪检测转染后是否有CFSC细胞凋亡。结果成功构建pGEM-T/TIMP-1重组质粒；获得了TIMP-1的siRNA，将siRNA转染体外培养的CFSC，随着转染时间的延长，CFSC产生的TIMP-1mRNA表达水平受到抑制，抑制率分别为49.18％、58.72％和64.73％；但siRNA转染CFSC后，CFSC的凋亡不明显。结论体外转录法获得的TIMP-1siRNA可明显抑制大鼠肝纤维化细胞株(CFSC)内源性TIMP-1mRNA的表达，且TIMP-1mRNA表达下降可能不会引起CFSC细胞凋亡。
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