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近几年,蜂王浆消费市场中“蜂王浆激素论”甚嚣尘上,使消费者对食用蜂王浆失去信心,搅乱蜂产品消费市场,给蜂产品行业甚至整个蜜蜂产业的健康发展带来沉重打击。早期研究显示,采用放射性免疫分析方法在蜂王浆样品中发现含有痕量的睾酮、孕酮和雌二醇等内源性激素。但是受当时技术手段限制,所采用的方法易呈现假阳性结果;另一方面,早期研究的目标化合物种类也较少。本研究建立了快速、灵敏和稳定的分析方法,全面系统的研究蜂王浆中类固醇类激素的种类分布和具体含量,还原蜂王浆的本来面目,并且为蜂王浆中类固醇激素的监测预警提供理论依据。本研究分为三部分,第一部分建立了蜂王浆中4种雌激素的分散固相萃取-高效液相色谱-串联质谱(QuEChERS-HPLC-MS/MS)分析方法,经过提取、净化、衍生、浓缩等过程将目标化合物高效地从蜂王浆基质中分离提取,采用建立的仪器方法对4种化合物进行准确的定性定量分析。经方法学验证,结果显示线性范围0.10 ng/kg-10.0 ng/kg内,相关系数R~2大于0.99,检测限范围为0.015 ng/kg-0.02 ng/kg,定量限为0.1 ng/kg,在0.1 ng/kg,1.0 ng/kg和10.0 ng/kg三个添加水平下,4种雌激素的基质效应范围在90.0%-120.0%之间,说明该方法无明显基质效应,回收率范围在80.7%-113.0%之间,日内RSD不大于5.3%,日间RSD不大于8.8%。本研究开发的方法具有快速高效、灵敏度高、环境友好等优点,非常适合用于蜂王浆中4种雌激素的定性定量分析。第二部分建立了蜂王浆中45种类固醇激素QuEChERS-UPLC-MS/MS高通量分析方法,筛查的目标化合物包括4种雌激素、12种雄性激素、9种孕激素、17种皮质激素和3种人工合成雌激素。蜂王浆样品经过高效提取目标化合物,净化基质杂质,并浓缩后直接上机检测,无需衍生化步骤,简便省时。HPLC-MS/MS分析过程中,质谱检测器通过两种梯度洗脱程序和正负离子监测模式对蜂王浆样品中的45种化合物同时进行检测分析,实现高效和高通量特点。经方法学验证,在一定线性范围内,45种目标化合物的R~2不小于0.99,检测限范围为0.003μg/kg-0.60μg/kg,定量限范围为0.01μg/kg-0.20μg/kg。在1.0μg/kg、10.0μg/kg、100.0μg/kg三个添加水平下,45种类固醇激素的基质效应范围在85.0%-120.0%之间,说明方法无明显基质效应,回收率均在66.49%-113.47%之间,日内RSD不大于9.89%,日间RSD不大于13.75%,均在可接受范围内。因此,所建方法满足蜂王浆中类固醇激素的高通量筛查要求。与蜂王浆中4种雌激素的检测分析方法相比,所建立的高通量方法在所筛查的目标化合物范围上明显扩大,在省去衍生化步骤后,仍具备高灵敏度的特点。第三部分,采用雌激素高灵敏度检测方法对2015年采集237批次蜂王浆样品进行分析,采用类固醇激素高通量检测方法对2016年采集81批次蜂王浆样品进行测定,并对检出率、类固醇激素检出种类和含量进行分析。