【摘 要】
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目的:探究干细胞白血病（Stem Cell Leukemia,SCL）基因和缝隙连接蛋白-43（Connexin43,Cx43）基因联合作用对豚鼠糖尿病膀胱（Diabetic Cystopathy,DCP）功能的影响和机制探索。方法:90只2～3月龄的健康雄性豚鼠,给予饲料及蔬菜喂养1周后,按照200 mg/kg一次性腹腔注射链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）,定期每周监测随机血糖
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目的:探究干细胞白血病（Stem Cell Leukemia,SCL）基因和缝隙连接蛋白-43（Connexin43,Cx43）基因联合作用对豚鼠糖尿病膀胱（Diabetic Cystopathy,DCP）功能的影响和机制探索。方法:90只2～3月龄的健康雄性豚鼠,给予饲料及蔬菜喂养1周后,按照200 mg/kg一次性腹腔注射链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）,定期每周监测随机血糖,正常饲养12周后,通过尿流动力学检查筛选出40只符合DCP标准的豚鼠,将其随机分成4组:（1）糖尿病组、（2）SCL慢病毒组、（3）Cx43慢病毒组、（4）SCL+Cx43慢病毒组。糖尿病组经尿道向膀胱内灌注0.2 ml不含基因的空慢病毒,SCL组、Cx43组使用同样方法分别灌注SCL慢病毒和Cx43慢病毒0.2 ml,SCL+Cx43慢病毒组经尿道灌注SCL、Cx43慢病毒各0.2 ml。转染14天后进行尿流动力学检查,评估膀胱功能。检查后处死豚鼠,并迅速摘取出膀胱,制作膀胱逼尿肌肌条,进行离体肌条收缩实验,评估逼尿肌肌条的收缩频率和幅度。最后制作膀胱组织冰冻切片进行荧光双染采用激光共聚焦显微镜观察Cajal间质细胞（Interstitial Cells of Cajal,ICC）和Cx43的变化。结果:1、经尿道灌注SCL基因慢病毒和Cx43基因慢病毒可成功转染至豚鼠膀胱内,并稳定表达。2、SCL组和Cx43组与糖尿病组相比,在尿流动力学检查结果中无差异性（P＞0.05）,SCL+Cx43组较糖尿病组尿流动力学检查可见逼尿肌压、腹压、膀胱压均有改善（P＜0.05）。3、在离体逼尿肌肌条实验中,糖尿病组和正常组相比,糖尿病组的逼尿肌收缩幅度及频率明显下降（P＜0.05）,SCL组与糖尿病组相比逼尿肌收缩幅度及频率有所改善（P＜0.05）,Cx43组与糖尿病组相比,逼尿肌收缩幅度及收缩频率无差异性（P＞0.05）,SCL组和Cx43组之间比较没有差异性（P＞0.05）。SCL+Cx43组与糖尿病组相比,逼尿肌收缩幅度及频率有明显差异（P＜0.05）,SCL+Cx43组与正常组相比较也有差异（P＜0.05）。4、糖尿病组激光共聚焦可见ICC的数量减少,细胞梭形结构及细胞突起明显被破坏,出现细胞裂解状态。SCL组、Cx43组可见ICC样细胞的梭形结构和细胞突起有所改善,细胞数量无明显变化。SCL+Cx43组可见ICC样细胞的数量增多,细胞梭形结构及细胞突起均有所改善,并可形成ICC-二聚体。结论:经尿道联合灌注SCL基因慢病毒和Cx43基因慢病毒可以提高离体逼尿肌的收缩幅度和频率,并且较单一灌注改善效果更显著。逼尿肌压、腹压、膀胱压等尿流动力学检查指标改善情况也是联合灌注优于单一灌注。激光共聚焦显微镜观察到ICC细胞的数量增多,细胞结构有所改善,并观察到相近的ICC可以形成ICC-二聚体,我们推测形成的ICC-二聚体结构是联合灌注发挥作用的重要基础,具体机制还有待进一步研究。
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