杏鲍菇细菌性腐烂病病原鉴定及其生物防治初步研究

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杏鲍菇(Pleurotus eryngii)是一种重要的人工栽培食用菌,其肉质肥厚,质地脆嫩,营养丰富,具有较高的食用及药用价值,目前已普遍采用机械化设施化栽培。细菌性腐烂病是杏鲍菇栽培中常见的病害,其发病十分迅速,给杏鲍菇生产带来了严重的经济损失。本文调查了杏鲍菇细菌性腐烂病的症状和发生特点,对病原物进行了分离和鉴定,依据柯赫氏法则验证了病原物的致病性,并对两种病原物进行了形态学观察、最适生长温度和最适生长pH测定。在此基础上,通过平板抑菌圈试验及子实体防治试验进行植物提取物及生防细菌的筛选,探索生物防治方法。  本研究主要内容包括:⑴通过组织分离法从细菌性腐烂病发病子实体上获得了两种细菌,通过形态学观察、16S rDNA序列分析和保守基因rpoB、atpD和infB序列分析,确定其中一株为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida),另一株为欧文氏菌(Erwinia sp.),已有报道表明两种病原菌可引起杏鲍菇细菌性病害。⑵在致病性验证中,采用磨砂法对杏鲍菇的菌盖和菌柄进行伤口接种。结果显示,恶臭假单胞菌对杏鲍菇有较强的致病力,2d即现明显病症,子实体形成黄褐色病斑,最终完全腐烂;而欧文氏菌的症状有所不同,3d表现明显症状,菌柄出现淡黄色病斑,表面附着大量黄色黏液,菌盖上出现黄色细菌菌落瘤状物,仅危害子实体表面。从接种后的子实体上进行再分离,再分离物的培养特性及16S rDNA序列均与接种物一致。前期采用刺伤法进行接种,显示两种病原菌对杏鲍菇没有致病性,表明该方法不适用于该病害的致病性验证。⑶对两种病原细菌的最适生长温度和pH进行了研究。恶臭假单胞菌在15-35℃均可以生长,最适温度为29℃;pH在4-10范围内可以正常生长,最适pH为7。欧文氏菌在12-40℃范围均正常生长,最适温度为27-29℃;pH为4-8时均可生长,最适pH为6。⑷植物提取物抑菌试验中,通过平板牛津杯试验评估了10种植物对恶臭假单胞菌菌株的抗菌活性,选择出4种提取物进行下一步子实体病害防治试验。结果表明,银杏叶提取物抑菌活性最高,抑菌圈直径18.25mm,其后依次是蒲公英(13.75mm)、大蒜(11.00mm)和石榴(6.25mm),苍耳和花椒对恶臭假单胞菌没有抑菌活性。喷洒大蒜汁不仅无法有效控制细菌性腐烂病,而且引起杏鲍菇子实体发黄和畸形,总体上银杏叶提取物防治效果最佳,发病率为12.5%,且子实体形态及颜色正常。⑸拮抗菌抑菌筛选结果表明,香菇 L127发酵液对恶臭假单胞菌有较好的抑菌效果,抑菌圈直径为6.50mm;解淀粉芽孢杆菌对欧文氏菌有较强的抑菌活性,抑菌圈直径为8.53mm。在杏鲍菇子实体防治试验中,香菇发酵液表现出比香菇两倍浓缩液更佳的抑菌活性,细菌性腐烂病发病率为16.7%;解淀粉芽孢杆菌过滤液抑菌效果最好,子实体发病率仅为11.1%。解淀粉芽孢杆菌抑制杏鲍菇菌丝生长,但不影响子实体正常生长且无致病性,其有效抑菌物质不耐高温,其生物防治潜力值得进一步研究。
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