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背景:生精障碍是男性不育的主要原因之一,而精原细胞增殖分化是精子发生的启动环节,其调控异常可以导致生精障碍,引起男性不育。维甲酸(RA)是维生素A在体内的活性代谢产物,能维持男性生殖系统正常发育,是启动精原细胞分化并进入减数分裂的关键因子,可促进精原细胞的增殖分化,其机制可能与精原细胞增殖分化相关蛋白CCND1有关。本研究采用环磷酰胺和己烯雌酚两种复合药物建立稳定的生精障碍小鼠动物模型为研究对象,观察RA对模型小鼠生精障碍及睾丸组织中CCND1表达的影响,初步探讨RA改善生精障碍的分子机制,为临床应用RA改善生精障碍男性的生殖功能提供实验依据。方法:雄性昆明小鼠136只,随机分为正常对照组和模型组,模型组包括环磷酰胺(CP)组、己烯雌酚(DES)组以及CP+DES组,腹腔注射,共计给药14天,采用精子计数、睾丸和附睾组织切片HE染色检测生精障碍模型是否成功,并选出最适的造模药物浓度和方法。RA溶于DMSO后用玉米油稀释成目标浓度,模型小鼠皮下注射不同剂量的RA(0,2.5,5,10 mg/kg/d),或用RA(5 mg/kg/d)和雷帕霉素(RAPA,2.5 mg/kg/d)共处理模型小鼠,分别于给药后第2和4周处死小鼠,分离并取出附睾和睾丸称重,组织切片后经HE染色观察生精上皮的形态,附睾精液涂片观察精子质量;采用Western-blotting免疫印迹、免疫组织化学和免疫荧光技术等检测生精障碍小鼠睾丸中的CCND1、Bax以及Bcl-2的表达。结果:与正常对照组比较,生精障碍模型组小鼠的精子密度、精子活动率和睾丸指数明显下降,而精子畸形比率显著增加,提示CP联合DES腹腔注射法可以稳定建立生精障碍小鼠模型;与模型对照组比较,采用中、高剂量RA处理的模型小鼠在治疗后第4周各项指标得到显著改善,其睾丸质量、睾丸指数和精子密度均趋向于正常值,精子活率增加约50%(P<0.05),前向运动精子比率增加超过38%(P<0.05),并且其精子畸形率也显著下降(P<0.05);同时,与正常对照比较,免疫组织化学或Western blotting免疫印迹显示模型组小鼠睾丸组织的CCND1表达显著下调,促凋亡蛋白Bax表达上调,抑凋亡蛋白Bcl-2表达下调;与模型对照组比较,RA可以明显改善模型组小鼠生殖细胞的凋亡状况,使用RA可上调CCND1和Bcl-2的表达,并下调Bax的表达;与单独用RA处理的模型组小鼠比较,以RAPA和RA共处理的模型组小鼠的生精障碍加剧,CCND1蛋白的表达下调。结论:1.复合应用环磷酰胺和己烯雌酚有效构建了较稳定的生精障碍小鼠模型;2.RA可抑制精原细胞的凋亡,改善复合药物诱导的小鼠生精障碍,其机制可能与上调CCND1的表达有关。