花色苷和果胶基于肠道菌群对肥胖小鼠的协同干预研究

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肥胖是机体能量代谢失衡引起脂肪堆积的一种身体状态,常伴有高血糖、高血压、动脉粥样硬化等慢性疾病的发生。果胶和花色苷分别作为常见的水溶性膳食纤维和多酚类物质,其减脂效果和作用机制得到广泛研究,但是关于果胶和花色苷是否具有协同作用却缺少足够的证据支持。本课题旨在探究花色苷与果胶复合物对肥胖小鼠的协同减脂作用,并通过体外模拟结肠发酵,进一步探究复合物发挥作用可能的机理,以及花色苷粗提物中不同花色苷单体的生物利用度,以期为肥胖人群提供膳食指导。主要研究内容如下:(1)通过高脂饮食诱导形成肥胖小鼠模型(C57BL/6J),正常饮食小鼠做对照,采用日常灌胃矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(Cyanidin-3-O-glucoside,C3G)、果胶、C3G-果胶复合物、洛神花花色苷粗提物(Roselle extract,RE)探究各干预物的减脂效果。结果表明,与对照组相比,高脂饮食组小鼠体重增量、Lee’s指数、附睾脂肪、肾周脂肪、血糖指数、甘油三酯(Triglyceride,TG)显著增加。C3G、C3G-果胶复合物干预后小鼠体重增量显著降低,高脂饮食诱导的肝脏脂质蓄积和肝脏损伤得到缓解。C3G-果胶干预后小鼠结肠(Short chain fatty acids,SCFAs)总量、乙酸和戊酸含量显著增加,RE干预后小鼠结肠乙酸含量显著增加。C3G、C3G-果胶复合物和RE降低了小鼠肠道微生物Chao1指数。在微生物门水平,C3G-果胶复合物显著增加了肠道Firmicutes/Bacteroidetes的比例,RE降低了Proteobateria相对丰度。在微生物属水平,C3G、C3G-果胶和RE显著上调了Parabacteroides、Bifidobacterium的相对丰度。C3G、C3G-果胶显著增加了Alistipes的表达。同时,C3G-果胶也显著上调了Ruminococcaceae、Lachnospiraceae的相对丰度。综上,C3G、果胶协同减轻了肝脏脂质蓄积和损伤,上调了促进减脂的相关肠道微生物及其代谢产物,RE减脂效果不及C3G单体组。(2)通过体外模拟结肠发酵,探究C3G和果胶单独与复合发酵对彼此降解的影响。结果表明,C3G-果胶复合物组与C3G组相比,果胶的存在影响了C3G的代谢途径,调节了代谢产物的比例。果胶、C3G-果胶复合物组SCFAs总量、乙酸、丙酸含量显著增加,C3G-果胶复合物组丁酸含量显著上升。果胶、C3G-果胶复合物组菌群多样性显著增加。微生物门水平上Bacteroidetes的比例显著上升,Proteobacteria、Fusobacteria的相对丰度显著降低。属水平上,C3G-果胶复合物组显著促进了益生菌Lactobacillus、Bifidobacterum的生长。综上,C3G与果胶复合后改变了C3G的代谢,能协同改善肠道微生物和SCFAs,有助于协同发挥减脂作用。(3)本论文所用RE的主要成分是4种花色苷混合物(含C3G),通过纯化分离获得花色苷单体,并进行体外模拟结肠发酵,探究花色苷混合物减脂作用不及C3G单体的原因。RE经过大孔树脂、阳离子交换柱后得到纯化产品,经半制备型高效液相色谱对花色苷进行分离和制备,得到4种单体单体,其中含有2种双糖苷花色苷、2种单糖苷花色苷。体外模拟结肠发酵监测花色苷的降解情况,结果显示,含双糖苷的花色苷降解速率显著低于单糖苷花色苷,这可能使得RE在体内的生物利用度低,成为其减脂作用不及C3G单体的原因。
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