论文部分内容阅读
研究目的:本文建立了比格犬血浆中盐酸小檗碱的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)定量分析方法,并对上述试验方法进行了方法学可靠性的确证,同时对比格犬口服给予盐酸小檗碱低(10 mg/kg)、中(20 mg/kg)、高(40 mg/kg)三个剂量组,静脉注射给予盐酸小檗碱溶液(1 mg/kg)以及口服多次给药(20mg/kg)后血浆中的药物浓度进行了检测,进而对盐酸小檗碱的临床前药代动力学过程进行评价。研究方法:本研究采用液-液萃取的方法将盐酸小檗碱从血浆中提取出来,然后进入LC-MS/MS系统做定量分析。采用乙腈-0.5%甲酸水溶液作为流动相等度洗脱(45:55,v/v),待测物盐酸小檗碱经过 ZORBAX300SB-C18 柱(4.6X150mm I.D.,5μm)分离后,进入质谱检测系统,流速为1mL/min。采用多重反应监测的正离子扫描模式,电喷雾离子源,定量分析的线性范围是0.01-3 ng/mL,用于定量的反应离子对分别为m/z336.1→ m/z 320.1(小檗碱)和m/z 256.3→ m/z 167.1(内标苯海拉明)。本方法严格遵守CFDA的相关规定,对分析方法做了完整全面的方法学验证,对试验的准确度、精密度、样品稳定性、专属性、定量下限、提取回收率和基质效应等方面进行了考察。试验分别采集比格犬经三剂量口服给药、静脉注射给药以及多剂量口服给药后的血浆样品,并对采集的样品进行血药浓度定量测定,绘制血浆药物浓度-时间曲线,使用DAS 3.0软件计算相关药代参数,同时用SPSS 17.0对各项药代动力学参数进行了相关性分析,考察盐酸小檗碱比格犬体内临床前吸收药代动力学特征。研究结果:本论文建立了比格犬血浆中盐酸小檗碱的LC-MS/MS定量方法。该方法专属性强,分析时间短,线性范围合理,样品前处理过程简便,完全适用于本试验的分析定量研究工作。同时,本试验严格遵守国家相关规范,进行了严谨系统的方法学确证,验证方法的准确性和可靠性,使方法适用于盐酸小檗碱比格犬体内的定量分析研究。比格犬口服给予盐酸小檗碱片剂后,低、中、高三剂量Cmax分别为1.18±0.36 ng/mL、1.17±1.02 ng/mL、1.90±0.91 ng/mL,tmax 分别为 7.50±0.55 h、7.17±0.98 h、9.33±1.21 h,t1/2 分别为 20.42±7.07 h、17.50±5.62 h、24.85±16.33 h,MRT 分别为 24.29±2.90 h、28.21±5.58h、28.26±2.17h,AUC0→t 分别为 17.85±7.40ng/mL·h、32.26±27.39ng/mL-h、33.10±13.85ng/mL·h,AUCo→oo分别为 18.59±7.17ng/mL·h、32.94±27.49ng/mL·h、35.99±11.66ng/mL.h,Vd/F 分别为 19249.53±10841.92L/kg、23709.10±17353.20L/kg、48986.39±41143.18L/kg,CL/F 分别为 620.22±263.69L/h/kg、857.07±402.94L/h/kg、1252.85±548.37 L/h/kg。比格犬静脉给予小檗碱原料药后,Co为283.53±115.65 ng/mL,t1/2为19.19±5.18h,MRT为4.53±0.61h,AUC0→t为78.06±7.54ng/mL.h,AUC0→∞为109.07±23.30 ng/mL-h,Vd/F%301.26±176.79 L/kg,CL/F%9.53±2.05 L/h/kg.比格犬经多次给药后,Cmax为3.01±1.26ng/mL;tmax为9±0.89h,t1 为21.49±5.08h,AUC0→t为 32.96±8.75 ng/mLIh,AU0→∞为 34.92±9.82 ng/mL.h,MRT 为 28.72±3.57 h,CL/F 为 622.9±221.95 L/h/kg,Vd/F 为 19390.80 ±9616.67 L/kg。用 SPSS 17.0(Statistical Product and Service Solutions 17.0,IBM)软件对主要药动学参数进行了相关分析,结果表明,Cmax及AUC与剂量不呈线性关系(p>0.05),在口服10mg/kg-40mg/kg给药剂量范围内,小檗碱在比格犬体内为非线性药动学;根据比格犬口服给药的低剂量组和静脉组AUC0→t结果计算小檗碱绝对生物利用度为2.29%;多次给药后的蓄积因子为1.0,说明小檗碱在体内没有蓄积。