荧光标记技术起源于20世纪40年代,随着现代医学、分子生物学的发展和各种先进荧光检测技术及仪器的应用,荧光标记作为一种非放射性的标记技术受到很大程度的重视,并取得了迅速的发展,广泛应用于细胞内外物质检测、核酸的检测及疾病早期诊断等。近红外荧光试剂Cy系列是不同杂环核通过甲川链连接起来的一类不饱和杂环化合物,在检测及定量标记组分时具有很高的消光系数及量子产率,成为基因芯片测试用的首选荧光标记物。Cy系列试剂虽然已商品化,如Cy3、Cy5、Cy5.5,但价格昂贵,使得其应用受到了限制。鉴于Cy系列试剂的广泛用途和应用前景,探索低成本,高收率的合成方法,无疑会拓宽Cy系列荧光试剂在国内的应用,促进生物学和医药学的发展。本文探讨了生物荧光分析试剂Cy系列的合成研究,报告了该研究的思路和取得的成果。 本文第一章首先综述了常见的荧光标记试剂以及它们的优缺点,重点介绍了Cy系列试剂的结构特点、光谱特征、光稳定性及水溶性。由于Cy系列试剂的特殊结构使其在荧光标记方面与其他试剂相比有着显著的优点,在生物芯片和蛋白质组学方面得到了广泛的应用,因此文章综述了Cy系列试剂在DNA芯片和蛋白质组学研究中的标记方式以及应用。 第二章探讨了对肼基苯磺酸的合成工艺。对肼基苯磺酸是由对氨基苯磺酸经亚硝酸钠重氮化得到的重氮盐用亚硫酸氢钠还原、水解、硫酸酸化制得,本文经多次实验确定了反应原料、用量及反应条件,得到的产品纯度好,产率高。 论文第三章合成了β-苯胺基丙烯醛缩苯胺。该研究以丙炔醇为原料,经三氧化铬氧化生成丙炔醛后,直接与苯胺反应简便地合成了β-苯胺基丙烯醛缩苯胺,并通过正交实验的方法优化了反应条件。得出最佳反应条件为:6.3mL(0.10mol)丙炔醇中加入8.5g(0.085mol)三氧化铬的硫酸水溶液,氧化反应2小时后,有机相在冰浴冷却下再与25mL(0.25mol)苯胺和63mL10%盐酸反应得到β-苯胺基丙烯醛缩苯胺盐酸盐,收率为48.4%。将该盐酸盐溶于甲醇与氢氧化钠溶液作用得β-苯胺基丙烯醛缩苯胺。 论文第四章合成N,N′-二苯基甲脒,本合成法以甲酸与苯胺为原料,硼砂为催化剂,并在脱水剂的存在下,经两步脱水反应而得二苯甲脒盐酸盐,再经碱化得最终产品。本文还通过~1H NMR跟踪反应,确定了合成二苯甲脒的最佳反应时间,在不影响反应收率的前提下,大大缩短了反应时间。