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目的:过敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura,HSP)是儿童期常见的一种全身性变态反应性小血管炎。临床表现以非血小板减少性紫癜、关节炎或关节痛、胃肠道受累和肾炎为主。多见于学龄期儿童,以冬春季发病为多。其发病机理尚不十分清楚,目前多认为HSP的发病非单一因素所致,可能是个体遗传性、环境因素(如感染等)和免疫异常等综合作用的结果。
Th17细胞是近年来新发现的辅助性T细胞亚群,能分泌IL-17,IL-22等多种炎症相关细胞因子,在参与机体防御细菌感染、介导慢性炎症、自身免疫疾病和肿瘤发病中发挥重要作用。调节性T细胞(regulatory Tcell,Treg)是一群具有免疫抑制和免疫调节功能的细胞,在机体维持免疫耐受、免疫自稳以及防止自身免疫性疾病方面具有重要的作用。维甲酸相关孤儿受体(retinoic acid related orphan receptor)RORγt是Th17细胞的特异性转录因子,在人类的同源物称为RORC。RORγt在Th17细胞分化发育中起着重要作用,RORγt缺陷的CD4+T细胞其IL-17的表达量显著下降,而RORγt的高表达则能够诱导初始CD4+T细胞表达IL-17。叉状头/翅膀状螺旋转录因子(forkhead/winged helix transcription factor)Foxp3特异的高表达于调节性T细胞,对Treg细胞的分化以及发挥生物学功能均起着重要的作用。Th17细胞与Treg细胞都来源于初始T细胞,两者在分化过程中相互联系。局部微环境的改变影响初始T细胞的分化,在转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)存在时诱导初始T细胞分化为Treg细胞,TGF-β和IL-6共同存在时诱导初始T细胞分化为Th17细胞。在转录水平上,转录因子Foxp3能与RORγt结合从而抑制后者的功能。另外,细胞因子调节的RORγt和Foxp3的平衡状态决定了细胞受抗原刺激后向Th17细胞或向Treg细胞的分化。在正常情况下Th17细胞和Treg细胞保持平衡,有利于机体的免疫稳定状态的维持,而两者之间的失衡是许多自身免疫性疾病及炎症发生的一个关键因素。
本课题拟应用实时荧光定量RT-PCR检测过敏性紫癜患者外周血中RORC、Foxp3 mRNA的表达,通过探讨控制Th17细胞和Treg细胞分化的关键性转录因子之间的关系,研究过敏性紫癜患者体内Th17/Treg细胞是否有失衡状态,从而从转录水平上了解Th17/Treg细胞对过敏性紫癜的发病的影响。
方法:30例过敏性紫癜患者均来自河北医科大学第二医院皮肤科门诊,其中男17例,女13例。平均年龄(22.60±8.26)岁,病程2天-3月。起疹前有明确感染史者14人,无感染史者16人。患者组入选标准:(1)具有典型皮肤紫癜表现,伴或不伴腹痛及关节痛、血尿等症状,血小板计数、功能及凝血相关检查正常;(2)未合并自身免疫性疾病、过敏性疾病、肿瘤和其他严重系统性疾病;(3)受试前1月内未使用糖皮质激素或其他影响全身免疫功能的药物。对照组:15例健康人群,均无过敏性疾病、自身免疫性疾病及家族史。经统计学分析,患者组性别、年龄与对照组均无统计学差异。研究对象抽取外周静脉血,采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR技术检测外周血单个核细胞中RORC mRNA和Foxp3 mRNA的表达状况。所有数据应用SPSS13.0统计软件分析,两组间比较选用t检验,多组间比较用单因素方差分析或Kruskal-Wallis H检验。P＜0.05有统计学意义。
结果:
1过敏性紫癜患者与正常对照组RORC基因△Ct值分别为2.00±0.46与3.29±1.57,过敏性紫癜患者RORC mRNA的表达水平高于正常对照组,有显著性差异(P＜0.05)。
2过敏性紫癜患者与正常对照组Foxp3基因△Ct值分别为4.08±1.05与4.85±1.52,过敏性紫癜患者Foxp3 mRNA的表达水平与正常对照组相比,无显著性差异(P＞0.05)。
3有感染史者RORC mRNA的表达水平高于无感染史者及正常对照组,具有显著性差异(P＜0.05)。无感染史者RORC mRNA的表达水平也高于正常对照组,具有显著性差异(P＜0.05)。
4有感染史者Foxp3 mRNA的表达水平高于正常对照组,且具有明显差异(P＜0.05)。
5过敏性紫癜患者中,RORC mRNA和Foxp3 mRNA的表达水平经统计学spearman相关性分析,无明显相关性(P＞0.05)。
结论:
过敏性紫癜患者外周血中RORC mRNA呈高表达,表明Th17细胞数量增多的可能性极大,免疫损伤因素增加,RORC/Foxp3 mRNA的比值在过敏性紫癜患者中高于正常对照组,说明过敏性紫癜患者机体内存在Th17/Treg细胞失衡,介导炎症反应的Th17细胞与介导免疫耐受的Treg细胞之间的平衡破坏是该病发生机制中的一个重要因素。发病前的感染因素影响过敏性紫癜患者RORC、Foxp3 mRNA表达的水平,可能直接或间接地促成了过敏性紫癜的发生。