【摘 要】
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目的:焦亡作为一种免疫原性死亡可以重塑“炎症性”免疫微环境促进免疫检查点抑制剂疗效。因此,本研究旨在筛选可以诱导三阴性乳腺癌细胞焦亡的小分子药物,进而重塑三阴性乳腺癌免疫微环境促进其免疫检查点抑制剂疗效。方法:本研究纳入27种FDA批准用于临床的小分子药物处理三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231,并采用显微镜观察细胞焦亡的特殊形态广泛筛选可以诱导三阴性乳腺癌细胞焦亡的小分子化合物;进一步通过流式细
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目的:焦亡作为一种免疫原性死亡可以重塑“炎症性”免疫微环境促进免疫检查点抑制剂疗效。因此,本研究旨在筛选可以诱导三阴性乳腺癌细胞焦亡的小分子药物,进而重塑三阴性乳腺癌免疫微环境促进其免疫检查点抑制剂疗效。方法:本研究纳入27种FDA批准用于临床的小分子药物处理三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231,并采用显微镜观察细胞焦亡的特殊形态广泛筛选可以诱导三阴性乳腺癌细胞焦亡的小分子化合物;进一步通过流式细胞术,检测胞外乳酸脱氢酶的释放和Westernblot等方法进行验证;接着,通过Westernblot检测诱导焦亡的消皮素家族蛋白的剪切以及通过转染si RNA敲减消皮素蛋白找出介导小分子药物诱导细胞焦亡的膜打孔蛋白;进一步通过ROS抑制剂和小分子药物受体的si RNA深入探究机制;最后,在体内探讨小分子药物的抑瘤效果、诱导肿瘤焦亡水平和对免疫微环境的重塑。结果:在小分子药物广泛筛选实验中创新性发现组胺H1受体抑制剂特非那定较显著的诱导三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231焦亡,并在BT549以及鼠源三阴性乳腺癌细胞4T1中得以验证;特非那定特异性通过诱导GSDME剪切活化介导三阴性乳腺癌细胞焦亡;进一步机制探讨发现通过下调ROS可以逆转特非那定诱导GSDME剪切活化介导的三阴性乳腺癌细胞焦亡,且不依赖于特非那定经典受体组胺H1受体;在体内水平发现特非那定可诱导肿瘤细胞焦亡、重塑免疫微环境并抑制肿瘤生长。结论:（1）我们筛选出了特异性诱导三阴性乳腺癌细胞焦亡的小分子药物特非那定,并阐明了ROS-Caspase 3-GSDME信号轴介导了特非那定诱导三阴性乳腺癌细胞发生焦亡的机制;（2）特非那定可能通过诱导肿瘤细胞焦亡重塑小鼠肿瘤免疫微环境促进CD8 T淋巴细胞浸润及功能因子Granzyme B的表达,有望与免疫检查点抑制剂联用以改善三阴性乳腺癌的预后。
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