论文部分内容阅读
第一部分显微镜下多血管炎外周血CD4+T淋巴细胞TLR/MyD88信号通路基因表达谱的研究【目的】本实验运用基因芯片技术检测显微镜下多血管炎活动期患者外周血CD4+T淋巴细胞TLR/MyD88信号通路相关基因mRNA表达水平,筛选显微镜下多血管炎患者与健康人群差异性表达的基因。【方法】选择采集显微镜下多血管炎活动期患者18例(病例组)和健康志愿者16例(健康对照组)作为实验对象,收集患者的临床资料。对所有实验对象外周血CD4+T淋巴细胞进行提取,从CD4+T淋巴细胞提取总RNA后逆转录合成cDNA。随机选择病例组和对照组各8例和6例,采用基因芯片技术检测TLR/MyD88信号通路相关基因mRNA的表达,用荧光定量PCR(RT-PCR)技术验证部分差异性基因的芯片结果。运用SPSS 17.0统计软件进行统计学分析,若与正常人相比较基因异常表达上调或下调超过1.5倍,且P<0.05认为差异有统计学意义。【结果】(1)与健康对照组相比,显微镜下多血管炎活动期患者中84个TLR/MyD88相关基因中有19个基因有差异性表达,其中有16个基因表达上调,分别是TLR4(3.46倍,P=0.0391)、TLR6(2.74倍,P=0.0064)、MyD88(1.57倍,P=0.0416)、TIRAP(1.77倍,P=0.0353)、TICAM1(1.73倍,P=0.0216)、TBK1(2.02倍,P=0.0064)、SOCS1(3.04倍,P=0.0022)、IL17A(4.66倍,P=0.0040)、RELA(1.78倍,P=0.0002)、NFRKB(1.66倍,P=0.0370)、IFNG(3.58倍,P=0.0020)、IRF1(1.73倍,P=0.0290)、MAP2K3(1.93倍,P=0.0099)、MAPK8IP3(2.10倍,P=0.0035)、CSF2(4.35倍,P=0.0037)、BCL2(1.90倍,P=0.0278),有3个基因表达下调,分别是CXCL8(-3.71倍,P=0.0375)、IFNA1(-5.45倍,P=0.0025)、CXCL10(-9.44倍,P=0.0466)。(2)RT-PCR验证结果随机从19个差异性表达基因选取4个基因进行RT-PCR实验验证,RT-PCR方法检测以下4个基因表达倍数如下TLR6(2.17倍,P=0.0385),TBK1(2.40倍,P=0.0414),RELA(1.94倍,P=0.0446),CXCL10(-2.46倍,P=0.0374),结果显示RT-PCR验证的差异性表达结果与基因芯片检测的差异性表达结果的趋势相一致。【结论】显微镜下多血管炎活动期患者外周血CD4+T淋巴细胞中84个TLR/MyD88信号通路相关基因中共有19个差异性表达基因。这些异常表达的基因涉及Toll样受体、依赖或非依赖MyD88信号途径通路、TLR负调控分子、TLR信号通路下游基因、炎症细胞因子及凋亡基因。提示T淋巴细胞中TLR/MyD88这条免疫炎症调节信号通路可能参与显微镜下多血管炎的发病机制。第二部分显微镜下多血管炎外周血CD8+T淋巴细胞TLR/My D88信号通路基因表达谱的研究【目的】本实验运用基因芯片技术检测显微镜下多血管炎活动期患者外周血CD8+T淋巴细胞中TLR/My D88信号通路相关基因m RNA表达水平,筛选其与健康人群差异性表达的基因。【方法】选择显微镜下多血管炎活动期患者17例(病例组)和健康志愿者15例(健康对照组)作为实验对象,收集患者的临床资料。对所有实验对象外周血CD8+T淋巴细胞进行提取,从CD8+T淋巴细胞提取总RNA后逆转录合成c DNA。随机选择病例组和对照组各8例和6例,采用基因芯片技术检测TLR/My D88信号通路基因m RNA的表达,用荧光定量PCR(RT-PCR)技术验证部分差异性基因的芯片结果。用SPSS 17.0统计软件进行统计学分析,若与正常人相比较基因异常表达上调或下调超过1.5倍,且P<0.05认为差异有统计学意义。【结果】(1)与健康对照组相比,显微镜下多血管炎活动期患者中84个TLR/My D88相关基因中有23个基因有差异性表达,其中有18基因表达下调,分别是CCL2(-9.61倍,P=0.0004)、LTA(-7.19倍,P=0.0008)、CXCL10(-5.3倍,P=0.0007)、TLR9(-4.97倍,P<0.0001)、IFNB1(-4.71倍,P=0.0029)、TNF(-4.35倍,P<0.0001)、BTK(-3.80倍,P=0.0026)、MUC1(-3.79倍,P=0.0071)、CD14(-2.54倍,P=0.0127)、FADD(-2.45倍,P=0.0028)、HSPA1A(-2.41倍,P=0.0087)、NFKBIL1(-2.35倍,P<0.0001)、TLR8(-2.31倍,P=0.0218),TNFRSF1A(-1.97倍,P=0.0041)、TLR6(-1.89倍,P=0.0262)、MAPK14(-1.76倍,P=0.0131)、ELK1(-1.65倍,P=0.0014)、IRF3(-1.64倍,P=0.0144)。有5个基因表达上调,分别是CASP8(1.82倍,P=0.0034)、IRF1(1.98倍,P=0.0057)、CIITA(2.15倍,P=0.0202)、PTGS2(3.02倍,P=0.0284)、IL10(5.71倍,P=0.0003)。(2)RT-PCR验证结果随机从23个有差异性表达基因中选择4个基因进行RT-PCR实验验证,RT-PCR方法检测这4个基因的表达倍数如下CXCL10(-3.90倍,P=0.0010),FADD(-3.76倍,P<0.0001),MAPK14(-1.55倍,P=0.0042),IRF1(2.12倍,P=0.0025),结果显示RT-PCR验证的差异性表达结果与基因芯片检测的差异性表达结果的趋势相一致。【结论】显微镜下多血管炎活动期患者外周血CD8+T淋巴细胞中84个TLR/My D88信号通路相关基因中共有23个差异性表达基因。这些异常表达的相关因子涉及Toll样受体、接头蛋白基因及TLR相互作用的蛋白基因、效应因子、TLR信号通路下游基因。提示T淋巴细胞TLR/My D88这条免疫炎症调节信号通路可能参与显微镜下多血管炎的发病机制。