植物乳杆菌MA2降胆固醇功能突变子的构建及相关基因的初步研究

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近几年来,随着生活水平的提高,人们饮食中的胆固醇含量日渐增高。而过高的胆固醇含量在人体内会诱发如冠心病、动脉硬化等一系列心脑血管疾病,对人们的身体健康造成了极大的威胁。因此,研究如何减低机体内胆固醇的方法成为近几年来学者的研究热门。其中,通过食用乳酸菌来降低胆固醇的方法逐渐引起人们关注。作为人们普遍能够接受的益生菌中的一类,乳酸菌来源广泛且使用安全。  本研究以本实验室保藏的一株具有良好降胆固醇能力的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)MA2为研究对象,利用人工Mμ转座重组技术对其进行转座诱变。对转座DNA的扩增,纯化和浓缩,随后制备转座复合物,利用电转化方法获得植物乳杆菌MA2的突变子,采用PCR方法进行验证,得到含有Mμ转座序列的阳性转化子。利用邻苯二甲醛法对获得的阳性转化子和植物乳杆菌MA2的体外降胆固醇能力进行测定,筛选出一株降胆固醇能力显著下降的阳性突变子,编号为MA2-Mμ。并且,相对于植物乳杆菌MA2,转化子MA2-Mμ的生长速度和总的生物量也发生了一定的改变。  随后,提取功能性转化子MA2-Mμ的基因组。根据Mμ转座DNA序列设计特异性引物,利用染色体步移中的连接介导PCR技术获得转座插入位点的侧翼序列,测序后获得Mμ转座DNA序列插入的3端的274 bp的基因序列。通过BLAST比对,确认了插入位点的序列为鼠李糖激酶基因,对该基因进行比对分析,探讨了该基因对植物乳杆菌MA2体外降胆固醇能力的影响。
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