【摘 要】
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目的 猪肺炎支原体(Mhp)感染引起的猪气喘病是一种全球性的疾病,造成猪群生长发育不良、生长率和饲料转化率降低,易引起继发性病毒或细菌感染,导致经济损失惨重.本研究建
【机 构】
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江苏省农业科学院兽医研究所,农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京,210014
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会
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目的 猪肺炎支原体(Mhp)感染引起的猪气喘病是一种全球性的疾病,造成猪群生长发育不良、生长率和饲料转化率降低,易引起继发性病毒或细菌感染,导致经济损失惨重.本研究建立了快速、敏感、特异的环介导恒温扩增技术(LAMP)检测高度保守性的Mhp P36基因,为该病的临床检测奠定基础.材料与方法 分别设计扩增靶基因的4条LAMP引物,试剂盒提取Mhp的DNA,取适量模板加入配制并优化好的LAMP反应体系,63℃45min完成对靶病原体基因的扩增,通过肉眼观察、SYBR GreenⅠ染色及电泳来判定扩增结果；分别以猪鼻支原体、猪絮状支原体、猪滑液支原体、猪呼吸与繁殖综合征病毒、猪胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌、猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪伪狂犬病毒等作为对照样品,检测其特异性；取Mhp标准质粒10倍倍比稀释,检测其敏感性.结果与讨论 Mhp模板经LAMP扩增后,肉眼观察有白色焦磷酸镁沉淀；SYBR Green Ⅰ染色和电泳均能观察到LAMP扩增产物的出现,电泳后呈现LAMP特征性梯状条带,阴性对照组及其他菌株均呈现阴性,建立的检测方法特异性强,可检测到标准质粒达10拷贝/μL,敏感性高,高于PCR.结论 成功建立的LAMP方法操作简单、快速、成本低、敏感性高、特异性强,为Mhp的检测提供新的发展方向,可用于Mhp临床诊断及流行病学调查,更利于基层检验检疫机构的应用.
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