【摘 要】
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[目的]筛选鸭胚成纤维细胞(DEF)中与鸭坦布苏病毒(DTMUV)NS1蛋白可能发生相互作用的蛋白质，为阐述坦布苏病毒的的致病机制，提出新的疾病防控思路提供理论依据[方法]设计带有BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点的引物以扩增到目的基因NS1.将带有酶切位点的NS1基因序列连接到载体pGBKT7构成诱饵载体pGBKT7-NS1.将诱饵载体pGBKT7-NS1转染Y2H酵母感受态，并进行诱饵的毒性和
【机 构】
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山东农业大学,动物科技学院,泰安271018
【出 处】
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第五届全国禽病分子生物技术青年工作者会议
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[目的]筛选鸭胚成纤维细胞(DEF)中与鸭坦布苏病毒(DTMUV)NS1蛋白可能发生相互作用的蛋白质，为阐述坦布苏病毒的的致病机制，提出新的疾病防控思路提供理论依据[方法]设计带有BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点的引物以扩增到目的基因NS1.将带有酶切位点的NS1基因序列连接到载体pGBKT7构成诱饵载体pGBKT7-NS1.将诱饵载体pGBKT7-NS1转染Y2H酵母感受态，并进行诱饵的毒性和自激活检测.将诱饵载体与鸭胚成纤维细胞cDNA文库双杂交，筛选鸭胚成纤维细胞cDNA文库中的目的蛋白，然后对筛选结果进行分析，[结果]载体酶切试验表明诱饵载体pGBKT7-NS1成功构建，诱饵的毒性和自激活检测试验表明酵母双杂交试验能够正常进行.经酵母双杂交试验从已构建好的鸭胚成纤维细胞cDNA文库中筛选出10个阳性克隆，经测序、Blast比对最终得到3个可能与鸭坦布苏病毒的NS1蛋白发生互作的目的蛋白.[结论]通过酵母双杂交技术，筛选出与鸭坦布苏病毒NS1蛋白互作的蛋白质，为明确坦布苏病毒的致病机制及鸭坦布苏病毒的NS1蛋白在病毒传播过程中的功能奠定了基础.
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