【摘 要】
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目的：本研究旨在通过整体、细胞和分子实验研究孕期地塞米松暴露(PDE)所致雄性子代足细胞发育毒性的miR-135a 编程机制.方法：Wistar 雌性大鼠自然受孕,分为正常对照组和PDE 组.PDE 组于孕9～20 天皮下注射0.2mg/kg.d 地塞米松,对照组给予等容量生理盐水.孕20 天处死部分母鼠,取雄性胎鼠肾脏待检.其余孕鼠自然分娩,雄性子代正常饲养至出生后6 周(PW6)或PW28 处
【机 构】
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武汉大学基础医学院药理学系,湖北武汉430071;发育源性疾病湖北省重点实验室,湖北武汉430071
【出 处】
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中国毒理学会表观遗传毒理专业委员会第一次学术大会
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目的：本研究旨在通过整体、细胞和分子实验研究孕期地塞米松暴露(PDE)所致雄性子代足细胞发育毒性的miR-135a 编程机制.方法：Wistar 雌性大鼠自然受孕,分为正常对照组和PDE 组.PDE 组于孕9～20 天皮下注射0.2mg/kg.d 地塞米松,对照组给予等容量生理盐水.孕20 天处死部分母鼠,取雄性胎鼠肾脏待检.其余孕鼠自然分娩,雄性子代正常饲养至出生后6 周(PW6)或PW28 处死,取肾脏待检.结果：与对照组相比,PDE 组成年子代大鼠血Scr 和BUN 明显升高.光镜下可见,PDE 组成年子代肾小球增生,囊腔狭窄.胎肾组织中,PDE 组生肾区/皮质区显著降低,肾小球囊腔空虚,提示胎肾发育不良.电镜结果显示,出生前及出生后不同时间点,PDE 组子代均足细胞的足突融合.进一步,我们发现,PDE 组不同时间点子代肾脏KLF4 及足细胞标志基因Nephrin、WT1、Podocin 的基因和蛋白表达均降低；肾脏miR-135a 启动子区H3K9ac 水平及其表达显著升高.同时,胎肾糖皮质激素受体GR、组蛋白乙酰化酶P300 的蛋白表达增加.细胞水平,利用原代大鼠后肾间充质干细胞(MMSCs)成足细胞分化模型,在分化中晚期予以不同浓度地塞米松处理72h.MMSC 分化模型中,地塞米松处理组不同时间点,KLF4 及足细胞标志基因均表达降低,miR-135a 表达升高,而抑制miR-135a 或过表达KLF4 均可逆转下游基因的表达变化.荧光素酶报告基因系统显示,转染GR 后miR-135a 转录激活增强,提示miR-135a 启动子区存在糖皮质激素反应元件(glucocorticoid responsive elements,GRE).不同浓度地塞米松处理细胞后GR、P300、Pol Ⅱ的mRNA 表达均显著增加.500 nM 地塞米松亦可显著增强细胞GR、P300、Pol Ⅱ与miR-135a 启动子区之间的结合.而沉默GR 或P300 均可部分逆转下游基因表达,逆转miR-135a 启动子区H3K9ac 的升高以及GR、P300、Pol Ⅱ与miR-135a 启动子区相结合.结论：地塞米松激活GR,结合于miR-135a 启动子区GRE,并进一步招募p300,诱导miR-135a 的组蛋白高乙酰化,致miR-135a 高表达编程改变,进而抑制KLF4 表达,抑制足细胞表型,造成足细胞发育毒性.
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