【摘 要】
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[目的]节球藻毒素(Nodularin,NOD)是一种对人体危害很大的藻类肝毒素,可以通过饮水和食用鱼类等水产品在人体内蓄积,因此有必要制备节球藻毒素单克隆抗体并建立其快速检
【机 构】
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北京食品营养与人类健康高精尖创新中心,中国农业大学动物医学院,北京100193
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医食品卫生学分会第十三次学术交流会
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[目的]节球藻毒素(Nodularin,NOD)是一种对人体危害很大的藻类肝毒素,可以通过饮水和食用鱼类等水产品在人体内蓄积,因此有必要制备节球藻毒素单克隆抗体并建立其快速检测方法.[方法]采用活泼酯法和巯基-点击化学法合成人工抗原NOD-BSA、NOD-KLH、NOD-戊二醛-BSA及NOD-戊二醛-KLH. 采用小剂量短周期方案免疫空白BALB/c雌性小鼠并筛选血清,选择阳性较强、抑制较好的细胞株进行4次亚克隆,将得到的2株能稳定分泌NOD单克隆抗体的杂交瘤细胞株2G5和6C2进行扩大培养.分别测定两种单抗的交叉反应率并建立检测NOD的间接竞争ELISA (icELISA)方法.优化各项反应条件后,将所建方法应用于水和鱼肉样本的分析中.[结果]用2G5和6C2建立的间接竞争ELISA方法,其IC50值分别为0.23 ng/mL、0.24 ng/mL,线性范围分别为0.11～0.47 ng/mL、0.09～0.64 ng/mL.将其应用于水样分析检测,水样中的检测限分别为0.10 μg/L、0.12 μg/L,添加浓度为0.3 μg/L、0.5 μg/L、1μg/L时,回收率为70.3％～81.7％,变异系数为6.3％～12.6％.应用于鱼肉样本分析,鱼肉中的检测限分别为0.43 μg/kg、 0.48 μg/kg,添加浓度为0.3 μg/kg、0.5 μg/kg、1μg/kg时,回收率为74.0％～82.1％,变异系数为7.2％～11.9％.[结论]本研究结果表明,制备的NOD单克隆抗体的灵敏度高,稳定性好,为水及鱼肉中节球藻毒素的检测提供了可靠的方法基础.
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