狂犬病疫苗细胞培养灭活验证法的建立

来源 :第十次全国生物制品学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sdgxsgl123
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:建立狂犬病疫苗细胞培养灭活验证实验方法。 方法:将9批狂犬病疫苗灭活样品和含有不同病毒量的CTN病毒悬液在Vero细胞上连续培养21天,丙酮固定细胞后,用抗狂犬病毒核蛋白单抗及相应的异硫氰酸荧光素标记的二抗做免疫荧光检测,同时将上述样品颅内接种小鼠,观察小鼠发病死亡情况。 结果:Vero细胞培养免疫荧光法检测的9批狂犬病疫苗灭活样品结果均为阴性,与小鼠接种法的检测结果一致。细胞培养法的检测灵敏度比小鼠接种法高10倍。 结论:本研究建立的狂犬病疫苗细胞培养灭活验证法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于狂犬病疫苗的灭活验证。
其他文献
目的:探索氢氧化铝佐剂戊肝疫苗的免疫原性与疫苗中PO43-浓度的关系,并探讨抗体滴度与抗原在羊淋巴液中吸附率的相关性。方法:用不同浓度PO43-处理氢氧化铝佐剂制备试验疫苗,腹腔免疫BALB/c小鼠,ELISA法定量检测免疫后不同时间血清抗体滴度。用钼酸铵还原法检测疫苗离心沉淀中的磷含量。采用兰格缪尔方程计算抗原在佐剂表面的最大吸附量(rm)。用ELISA法定量检测试验疫苗在羊淋巴液中的抗原吸附率
目的:观察人用冻干狂犬病疫苗[VERO细胞/CTN疫苗株]的安全性、免疫原性和抗体持久性。方法:对450名健康志愿者随机分为2组,300人(试验组)接种人用冻干狂犬病疫苗[VERO细胞/CTN疫苗株\],150人(对照组)接种进口冻干无佐剂狂犬病纯化疫苗,按照0天、3天、7天、14天、28天免疫程序。观察每针次接种后局部和全身反应,采用快速荧光灶抑制试验(RFFIT)检测0天(首剂接种前)、3天、
目的:探讨单价羊株轮状病毒活疫苗(LLR)在无菌兔体内的的免疫原性效果,建立研究人RV疫苗保护性免疫机制的新型动物模型。方法:采用无菌兔傲为实验模型,随机将无菌兔分为实验组和空白对照组,实验组接种LLR疫苗。利用ELISA检测接种LLR后无菌兔血清中IgA和IgG滴度及便样中RV抗原;利用流式细胞仪检测兔外周血CIM/CD8比值变化;免疫组化法检测小肠组织中轮状病毒VP6蛋白来观察轮状病毒疫苗是否
用含不同浓度的牛源性血红蛋白细胞培养液培养小鼠骨髓瘤细胞,通过细胞计数绘制生长曲线,计算最大增殖浓度和倍增时间,并进行比较分析。结果表明当培养液的血红蛋白浓度在1~5mg/dl时小鼠骨髓瘤细胞生长较好,细胞最大增殖浓度在1.2×106/mL以上,倍增时间小于20h,当培养液的血红蛋白浓度为6mff/dl时细胞生长抑制,细胞最大增殖浓度和倍增时间为6.7×105/mL和21.6h。由此可见,培养液中
利用分子克隆的方法,将中国狂犬病病毒街毒株HN10全基因组分为4个片段,按照它们在基因组上的顺序依次克隆到真核表达载体pVAX1上,并将G-L间隔区的非编码区替换为表达绿色荧光蛋白(CFP)的核苷酸,构建出表达GFP的重组狂犬病病毒HN10株全长基因cDNA真核表达质粒;同时,在全长cDNA的两侧嵌入锤头状核酶(HarnRz)和丁型肝炎病毒核酶(HdvRz)的序列,并置于CMV启动子的控制下,构建
在1969-2008年间,我们从全国各地共分离到60株街毒株,其中从犬脑中分离到41株,鼬獾中分离5株,人脑中分离到4株,鹿脑中1株,我们对这61株狂犬病毒株的N基因的进行了序列测定,初步分析后选取26株代表株与GenBank得到42株中国毒株N基因序列共计68株序列进行全面的进化分析。以探讨中国狂犬病毒株的基因分型和分组情况、时间和空间的动态进化。结果表明:我们发现目前分离的中国毒株都属于基因1
目的:构建抗CD4真核表达载体并在真核细胞中进行瞬时表达。方法:分别扩增人IgG1κ抗体恒定区基因和抗CD4鼠单抗可变区基因并采用SOE(Gene splicing byovertap extension)法进行拼接,然后分别与真核表达载体pOptiVECTM-TOPO和pOptiVECTM-TOPO进行连接。将构建的抗cD4真核表达载体pOptiVEC-H和pcDNA3.3-L以及pOptiVE
本实验通过DNA重组技术从一株可中和破伤风毒素的人源单克隆抗体细胞(G6)中扩增出了抗体的VH,VL基因,通过重叠PCR使连接片段与VH,VL连接成单体ScFv。经测序证实VH,VL为抗体的可变区序列,命名为ScFv-G6。将scFv-G6连接转化PET/26b质粒,构建了抗体的表达载体,命名为PET/26b/ScFv-G6。用这一载体在大肠杆菌中分泌表达,表达产物经Ni-亲和柱纯化后,小鼠试验证
目的:测定本品PEG-IFN-SA中残留游离IFN-SA对其体外活性的影响。方法:通过Gel-HPLC分离纯化PEG-IFN-SA,分别收集相应的Di—PEG—IFN—SA、PEG-IFN-SA和IFN-SA保留时间的组份峰。分离后的三组分按一定稀释倍数稀释后,分别测定其抗病毒活性(对WISH/VSV的保护作用),并计算生物活性单位。以PEG-IFN-SA原液100μl(0.5mg/mL)的总活性
目的:建立一种方法,用于分析和确定相关抗体的抗原表位。方法:用bMab G6筛选肽库,通过几轮筛选。获得目的肽段,分析肽段上的氨基酸保守序列,通过与破伤风毒素序列的一级结构比较,初步确定了抗体相对应的抗原表位。结果:获得G6的保守序列为:Q/A M/FXPWSH。结论:初步建立了一种分析抗原表位的方法。