【摘 要】
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目的 通过体外细胞水平实验研究黄连素人骨肉瘤MG-63细胞增殖、凋亡等生物学特性及细胞DNA损伤的影响,探讨其对骨肉瘤细胞的作用及机制,为黄连素在实践中用于骨肉瘤的治疗提供理论依据和实验基础.方法 1.细胞毒性作用分析：将人骨肉瘤MG-63细胞(100μL/孔,含1×104个细胞)加入到96孔板中,培养12 h后,分别用0–80μM黄连素处理细胞12 h和24 h.黄连素作用细胞后,用倒置显微镜观
【出 处】
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中华医学会第十八届骨科学术会议暨第十一届COA国际学术大会
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目的 通过体外细胞水平实验研究黄连素人骨肉瘤MG-63细胞增殖、凋亡等生物学特性及细胞DNA损伤的影响,探讨其对骨肉瘤细胞的作用及机制,为黄连素在实践中用于骨肉瘤的治疗提供理论依据和实验基础.方法 1.细胞毒性作用分析：将人骨肉瘤MG-63细胞(100μL/孔,含1×104个细胞)加入到96孔板中,培养12 h后,分别用0–80μM黄连素处理细胞12 h和24 h.黄连素作用细胞后,用倒置显微镜观察药物对MG-63细胞形态的影响,然后用MTT法测定药物人骨肉瘤细胞MG-63毒性作用.2.流式细胞仪检测MG-63细胞中黄连素诱导的细胞凋亡：20,40,60和80μM浓度的黄连素处理细胞12和24 h,细胞用预冷的PBS洗两次,悬浮在500μL结合缓冲液中使浓度为1×106细胞/ml；然后,加入5μL Annexin V-FITC溶液和5μL碘化丙啶(PI).细胞在37℃中孵育30min.1h内用流式细胞仪对细胞凋亡情况进行检测分析.3.DNA提取和DNA片段检测：分别用50μM黄连素和20μM MNNG处理细胞24 h后收集上清液.DNA片断用中性酚从上清液中提取通过凝胶电泳检测DNA片段并用凝胶成像系统观察分析结果.4.免疫荧光与H2AX焦点定量分析：将培养至对数生长期的人骨肉瘤MG-63细胞处理后用Olympus BX53荧光显微镜观察实验结果并进行γH2AX焦点定量分析.
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