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目的 利用生物素与亲和素间的高亲合力将αvβ3抗体偶联于微泡(MBαvβ3),在验证"生物素-亲和素-生物素"的夹层结构成功构建后,进而证明MBαvβ3特异黏附HUVECs特性.方法 薄膜-超声法制备生物素化微泡(MBB)：二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、聚乙二醇磷脂酰乙醇胺(DSPE)、生物素化聚乙二醇磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000-biotin)溶解后旋转蒸发成薄膜,水化后通入SF6气体,声振形成MBB.生物素-亲和素法偶联αvβ3单抗：每1×107/ml的MBB加入3μg亲和素(SA),孵育后浮选上层微泡(MBB-SA).每1×107/ml的MBB-SA加入7.5 μg生物素化小鼠抗人αvβ3单抗,浮选法收集上层MBαvβ3.体外荧光法鉴定其表面"生物素-亲和素-生物素"结构,应用平行平板流动腔(PPFC)技术评价MBαvβ3特异性黏附HUVECs的效能.结果 加入荧光标记的亲和素后,生物素化微泡(MBB)表面可见明亮荧光,普通微泡未见荧光；MBB加入荧光标记的蛋白A也未见荧光；MBB结合亲和素后,再加入荧光标记的生物素或蛋白A,前者表面可见明亮荧光,后者未见荧光.PPFC内,MBαvβ3组和普通微泡组结合数分别为9.9 ±3.1和0.8±0.3微泡/HUVEC(P＜ 0.05).结论 研制成功的MBαvβ3通过表面的"生物素-亲和素-生物素"夹层结构桥连抗体,且具有靶向血管内皮细胞的能力.讨论"生物素-亲和素-生物素"的夹层结构是MBt结合抗体的最佳桥梁.国内外尚鲜见对MBt表面"生物素-亲和素-生物素"夹层结构进行鉴定的研究.本研究采用体外荧光法验证了上述夹层结构.整合素αvβ3选择性表达于新生血管内皮细胞表面,已广泛运用于检测肿瘤新生血管和监测抗血管治疗.目前有4种评价MBt靶向效率的方法：①微泡水平；②细胞水平；③活体水平；④动物水平.其中,细胞和活体水平可以直接观察微泡的黏附,是证明MBt靶向能力的最有力证据.本研究采用体外黏附细胞实验评价自制的αvβ3-MBt.体外实验中,本研究建立了PPFC系统,直接观察MBt黏附靶细胞,说明制备的MBαvβ3具有靶向血管内皮细胞的能力.