【摘 要】
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针对猪圆环病毒2型ORF2的序列设计两对特异性引物及TaqMan探针,以猪圆环病毒2型的PK-15细胞培养物的DNA提取物为模板,分别扩增499bp和131bp的片段,成功建立了检测猪圆环病毒2型的TaqMan荧光PCR方法。结果表明:TaqMan荧光PCR检测PCV2的最佳探针浓度为0.5 pmol/μl；TaqMan荧光PCR两步法操作可快捷,扩增131bp的引物PCD1101/PCR1232
【机 构】
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上海出入境检验检疫局,上海,200135 中国农业科学院上海兽医研究所,动物传染病研究室,农业部动
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会
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针对猪圆环病毒2型ORF2的序列设计两对特异性引物及TaqMan探针,以猪圆环病毒2型的PK-15细胞培养物的DNA提取物为模板,分别扩增499bp和131bp的片段,成功建立了检测猪圆环病毒2型的TaqMan荧光PCR方法。结果表明:TaqMan荧光PCR检测PCV2的最佳探针浓度为0.5 pmol/μl；TaqMan荧光PCR两步法操作可快捷,扩增131bp的引物PCD1101/PCR1232检测有更高的敏感性(3.17×102拷贝/μl),有很好的重复性；在诸多检测样品中,只能检测到猪圆环病毒2型,针对猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒(PRRSV),日本乙型脑炎病毒(JEV),猪伪狂犬病毒(PRV),猪瘟病毒(HCV)及PK-15细胞阴性对照系统结果均为阴性,表明特异性好；与普通PCR的检测结果(2/10)比较,本方法的敏感性和对临床样品的阳性检出率(3/10)更高。上述研究表明,本方法快速、敏感、特异,具有很高的重复性,且可实时监测,从而有效检测猪圆环病毒2型。
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猪繁殖与呼吸障碍综合征两度在我国流行,目前仍呈蔓延之势.分析其中原因一方面是由于该病毒特有的逃避或调控机体免疫反应,致使现有常规疫苗免疫效力不理想所致,另一方面经济利益驱动人为因素也起到推波助澜的作用.建议加速新型疫苗和监测方法的研究,提倡猪场自行建立生物安全系统,为有效防控PRRS做出努力.
本文介绍化学发光免疫分析含有免疫分析和化学发光分析两个系统.免疫分析系统:将化学发光物质或酶作为标记物,直接标记在抗原或抗体上,经过抗原与抗体的特异性反应后,形成抗原-抗体免疫复合物.化学发光分析系统:在免疫反应结束后,加入氧化剂或酶的发光底物,化学发光物质经氧化剂的氧化后,形成一个激发态的中间体,处于激发态的中间体会发射光子释放能量以回到稳定的基态,发光强度可以利用发光信号测量仪器进行检测。然后
猪的戊型肝炎是一种新发现的传染病,其病原戊型肝炎病毒(HEV)是一种囊膜的RNA病毒,近年来的研究发现,猪是该病毒的天然宿主,世界上许多国家的猪群中均检测到高的HEV抗体,也检测到猪的戊型肝炎病毒,与猪接触的职业人群血清中抗HEV抗体均高于非职业人群,许多国家从猪群分离出的HEV与当地人的HEV在核苷酸序列具有高度的同源性。最新研究已经证实了同基因(亚)型戊肝病毒在人和猪种共同流行,从而证实了猪戊
从分泌抗狂犬病病毒糖蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取纯化总RNA,经RT-PCR扩增抗体轻、重链可变区基因,SOE-PCR扩增单链抗体基因(ScFv),将ScFv基因亚克隆入原核表达载体pET-28a(+),转化E.coli DH5α,特异性PCR及酶切鉴定重组质粒,阳性质粒转化表达宿主菌E.coli BL-21,IPTG诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE检测目的蛋白表达,ELISA检测ScFv与
从长春双阳地区某鸭场送检的疑似鸭病毒性肝炎的病例,采取病鸭肝脏分别进行细菌、病毒分离,结果分离到1株病毒,经病毒回归试验及血清学试验等方法,鉴定该病毒为Ⅰ型鸭肝炎病毒,但与标准株接种鸡胚产生的病变有一定的差别。
将小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)以每只200μg、100μg和50μg三个剂量分别肌肉注射免疫BALB/c小鼠、以PBS和空载体pcDNA3.1(+)为对照,于免疫后不同时间采取小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑、肠和免疫部位肌肉,应用荧光定量PCR检测pcDNA-GPV-VP3在各组织器官中的分布及含量情况。检测结果表明:1h在三个剂量免疫组小鼠的各组织器官中均检测到
禽流感病毒(Avian influenza virus AIV)属于正粘病毒科、流感病毒属、A型流感病毒.AIV感染禽类后可引起一种以呼吸系统乃至全身性败血症为特征的传染性疾病,即禽流感(Avian influenza AI)。1978年禽流感首次发生于意大利,当时称之为鸡瘟.1900年其病原体首次被人发现,1955年经血清学证实属A(甲)型流感病毒.此后禽流感病毒一直在世界各地家禽中普遍存在,并
为了评估野鸟在禽流感流行病学中的作用,于2004年4月～2005年6月间对上海地区捕捉到的63个品种的1010只野鸟进行了血样和喉肛棉拭样品的采集.采用病毒分离试验和荧光RT-PCR试验对喉肛棉拭样品进行了病原学检测,结果均为阴性；采用HA和HI试验进行了禽流感血清抗体的检测,结果在15种野鸟的587份血样中检出了44份AIV阳性抗体,其中H1阳性数3份,阳性率为0.51％；H3阳性数4份,阳性率
用RT-PCR对环鄱阳湖区的家禽及侯鸟进行了H5亚型禽流感病毒的检测。2005-2006年共检测品种10个,家禽的泄殖腔和喉气管棉拭子样品1040份,候鸟的粪便样品288份,候鸟的组织样品21份.结果表明,所有检测样品均为阴性,没有检测出H5亚型禽流感病毒的核酸.由此推断环鄱阳湖区的家禽和候鸟没有感染或带毒H5亚型禽流感病毒.