人泡沫病毒Tas蛋白多克隆抗体制备及探讨其临床应用前景

来源 :中国微生物学会2012感染与免疫学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:herewe
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  目的:探讨人泡沫病毒反式激活因子Tas在诊断病毒感染中的作用以及其感染机制,提高人泡沫病毒感染的临床检测水平。方法:通过进化树分析人泡沫病毒Tas蛋白与其它泡沫病毒Tas蛋白的同源性;以人全长泡沫病毒质粒pHSRV13为模板设计引物,用PCR的方法扩增出Tas基因,将酶切后的片段连接至pGEX-4T-1载体,构建pGEX-4T-1-Tas重组质粒;将测序正确的pGEX-4T-1-Tas重组质粒转化至大肠杆菌BL21感受态细胞,利用IPTG诱导表达GST-Tas融合蛋白,通过谷光甘肽-琼脂糖树脂纯化GST-Tas融合蛋白;将纯化后的GST-Tas融合蛋白免疫BALA/c小鼠,取免疫小鼠血清以获得抗Tas蛋白多克隆抗体,利用ELISA检测抗体效价,用Western-blot验证抗体的特异性。结果:人泡沫病毒Tas蛋白与其它泡沫病毒Tas蛋白的同源性较低;成功构建了pGEX-4T-1-Tas重组载体,并表达、纯化了GST-Tas融合蛋白,同时获得了能够特异性结合人泡沫病毒的Tas蛋白多克隆抗体。
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