【摘 要】
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为研究Ⅰ型草鱼呼肠孤病毒其外衣壳蛋白VP5,将编码草鱼呼肠孤病毒VP5蛋白的基因M6插入至转座载体pFastBacHTA中,构建重组质粒pFastBacHTa-M6,然后将重组质粒pFastBacHTa-M6转化至E.coli DH5α感受态细胞中,并通过LB/Amp平板筛选阳性克隆,经PCR鉴定并测序正确后,再转化至E.coli DH10Bac感受态细胞中,经抗性培养后进行蓝白斑筛选出显性白色克
【机 构】
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国家水生动物病原库,农业部淡水种质资源重点实验室,上海海洋大学水产与生命学院,上海,201306
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为研究Ⅰ型草鱼呼肠孤病毒其外衣壳蛋白VP5,将编码草鱼呼肠孤病毒VP5蛋白的基因M6插入至转座载体pFastBacHTA中,构建重组质粒pFastBacHTa-M6,然后将重组质粒pFastBacHTa-M6转化至E.coli DH5α感受态细胞中,并通过LB/Amp平板筛选阳性克隆,经PCR鉴定并测序正确后,再转化至E.coli DH10Bac感受态细胞中,经抗性培养后进行蓝白斑筛选出显性白色克隆进行扩增,通过琼脂糖凝胶电泳验证正确后,即产生重组杆粒.重组杆粒转染至Sf9昆虫细胞,在昆虫细胞内经复制、表达、装配等过程,形成重组杆状病毒,并表达草鱼呼肠孤病毒外衣壳蛋白VP5,经Western-blot分析,表达的VP5蛋白分子量约68Kda,通过间接免疫荧光试验证明重组VP5蛋白定位于sf9细胞膜上.利用杆状病毒表达系统成功表达草鱼呼肠孤病毒外衣壳蛋白VP5,从而研究GCRV外衣壳蛋白功能,并且为研究预防草鱼出血病亚单位疫苗奠定基础.
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对采自同一水域的野生和船体网箱养殖(船养)瓦氏黄颡鱼的肌肉营养成分进行了分析.结果 表明,野生瓦氏黄颡鱼粗蛋白、粗灰分和粗脂肪含量分别是船养的1.16、1.69和0.90倍.在检测到的17种氨基酸中,野生个体除酪氨酸和组氨酸含量低于船养外,其余均高于船养.野生瓦氏黄颡鱼总氨基酸、总必需氨基酸、总鲜味氨基酸分别是船养的1.18、1.51和1.13倍.野生瓦氏黄颡鱼必需氨基酸构成比例符合世界粮农组织/
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在常年寒冷的环境下，南极鱼类逐步适应并形成了一系列抗寒抗冻的机制。为了研究南极鱼的抗寒抗冻机制，我们将斑马鱼胚胎成纤维样细胞(ZF4细胞)于28℃野生型(对照组)或18℃培养驯化。两种细胞传代15代以上后放入10℃进行处理，我们发现18℃驯化后经过驯化的细胞凋亡程度明显降低。核型分析结果显示18℃驯化后的细胞更趋向于成为四倍体，细胞经PI染色也证实驯化后细胞内的DNA含量较未驯化的高。这表明在持续
为研究赤眼鳟(Squaliobarbus curriculus)Toll样受体9(Toll-like receptor9,ScTLR9)基因是否参与抗病毒免疫反应,通过RACE技术,首次克隆和分析了ScTLR9基因cDNA全长序列；通过Real-Time qPCR技术,检测了ScTLR9 mRNA在健康赤眼鳟10个组织中的分布以及感染草鱼呼肠孤病毒(GCRV)后在赤眼鳟和草鱼(Ctenophary
通过Long-PCR技术获得哈氏仿对虾(Parapenaeopsis hardwickii)线粒体全基因组,序列长度为15922bp,共包含13个编码蛋白基因、2个rRNA基因、22个tRNA编码基因和1个非编码的控制区.序列分析结果表明,编码蛋白基因的排列方式与泛甲壳动物线粒体基因组的原始排列完全一致,nad2基因的变异程度最高,而cox2基因最为保守.利用16SrRNA和COI基因序列进行了群
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本试验通过原虫净对褶皱臂尾轮虫的急性、慢性毒性试验,研究了原虫净对褶皱臂尾轮虫存活、生长和繁殖的影响.试验结果显示：原虫净对褶皱臂尾轮虫的24hLC50值为422.63ug/L,48hLC50值为302.86ug/L,应用Turubell公式得出其安全浓度为46.66ug/L.褶皱臂尾轮虫总生殖量随着原虫净浓度的升高而减少,存活天数随着浓度的升高而降低,产前发育天数随浓度的升高而延长,平均生殖次数
本实验应用吖啶酯(acridinium ester,AE)标记抗体,采用双抗体夹心化学发光免疫定量分析方法对仿刺参体腔液补体类似物等免疫因子进行定量检测.建立了补体化学发光免疫检测标准曲线,补体C3线性方程为：y=867.89Ln (x)+8963,相关系数为0.9949；补体C4线性方程为：y=3716.6Ln (x)+67101,相关系数为0.9970；测定结果显示,建立的检测方法能够检测到仿