【摘 要】
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目的:构建人源性抗HER2单链抗体(scFv)/精氨酸九聚体(9R)融合蛋白基因,在大肠杆菌里表达纯化并检测该融合蛋白的活性.方法:采用PCR的方法,扩增融合基因scFv-9R,将获得的基因
【出 处】
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中华医学会第十四届骨科学术会议暨第七届COA国际学术大会
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目的:构建人源性抗HER2单链抗体(scFv)/精氨酸九聚体(9R)融合蛋白基因,在大肠杆菌里表达纯化并检测该融合蛋白的活性.方法:采用PCR的方法,扩增融合基因scFv-9R,将获得的基因克隆入原核表达载体pQE30,在大肠杆菌M15中表达,表达产物经SDS-PAGE和Westernblot鉴定,通过Ni-NTA螯合层析纯化,透析复性,超滤浓缩.ELISA分析scFv-9R融合蛋白抗原亲和活性,凝胶迁移实验检测scFv-9R融合蛋白与siRNA结合活性.结果:成功构建了人源性抗HER2scFv-9R融合基因,经IPTG诱导后在M15中以包涵体形式表达.表达的目的蛋白scFv-9R能与HER2抗原结合,同时具有siRNA结合能力.结论:scFv-9R具有结合抗原与siRNA双重活性,为靶向递送siRNA的研究奠定了基础.
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