【摘 要】
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目的：探讨龙葵碱对HepG2细胞NAT酶米氏常数Km及最大反应速率Vmax的影响.方法：MTT法测定龙葵碱对消化系统SGC-7901人胃癌、HepG2人肝癌、Ls-174人大肠癌三种肿瘤细胞株的细胞毒作用,高效液相色谱(HPLC)法,以2-AF为底物,以2-AF的浓度为底物浓度,在HepG2完整细胞及细胞质内2-AF被NAT酶乙酰化为2-AAF的速度为NAT酶的反应速率,采用双倒数作图法.以底物2
【机 构】
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哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心药物研究所博士后科研工作站,黑龙江哈尔滨 150076 国家教育部抗肿瘤天然药物工程研究中心,黑龙江哈尔滨 150076
【出 处】
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中国药学会应用药理专业委员会第三届学术会议、中国药理学会制药工业专业委员会第十三届学术会议暨2008生物医药学术论坛
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目的：探讨龙葵碱对HepG2细胞NAT酶米氏常数Km及最大反应速率Vmax的影响.方法：MTT法测定龙葵碱对消化系统SGC-7901人胃癌、HepG2人肝癌、Ls-174人大肠癌三种肿瘤细胞株的细胞毒作用,高效液相色谱(HPLC)法,以2-AF为底物,以2-AF的浓度为底物浓度,在HepG2完整细胞及细胞质内2-AF被NAT酶乙酰化为2-AAF的速度为NAT酶的反应速率,采用双倒数作图法.以底物2-AF浓度的倒数1/S对NAT反应速率的倒数1/V作直线,得出回归方程.计算Km和Vmax.结果：MTT法测定表明龙葵碱对HepG2人肝癌细胞比较敏感,酶动力学研究表明,以2-AF为底物,对于HepG2完整细胞,阴性对照组的Km和Vmax分别为2.37x10-3±8.37×10-5 mM,9.16×10-4±7.54×10-5 nmol·106 cells-1,龙葵碱组的Km和Vmax分别为2.22×10-3±9.05×10-5 mM和5.14×10-4±3.72×10-5 nmol·106 cells-1.对于HepG2细胞质,阴性对照组的Km和Vmax分别为8.95×10-3±2.61×10-4 mM,2.55×10-6±1.92×10-8 nmol·min-1mgprotein-1,龙葵碱组的Km和Vmax分别为9.48×10-3±3.63×10-4 mM和2.43×10-6±1.32×10-8 nmol·min-1 mg protein-1,统计学表明对于HepG2完整细胞和细胞质,阴性对照组和龙葵碱组的Km没有差异,而Vmax统计学差异显著(完整细胞p<0.01,细胞质p<0.05).结论：龙葵碱是HepG2人肝癌细胞NAT酶2-AF底物的非竞争性抑制剂.
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