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MicroRNA(miRNA)是一类由18~22个核苷酸组成的内源性非编码核糖核甘酸,进化程度高度保守.研究发现,miRNA在干细胞分化、肿瘤形成、血管发生、内耳形成、白血病的发病、脂肪细胞的分化等过程发挥重要作用.MiRNA的发现有助于了解人体的生理功能和病理机制,提高在实验研究中调控蛋白质表达的能力,并有可能迅速成为基因治疗的一种新药.本研究基于原位杂交anti-DNA:RNA抗体(S9.6)和碱性磷酸酯酶修饰的电极构建了一种简单、灵敏、选择性高、免标记的miRNA生物传感器。首先将纳米金电沉积在玻碳电极表面,DNA通过自组装固定在电极表面。然后与miRNA杂交,再与特异性抗体59.6进行结合。最后与IgG标记的碱性磷酸酯酶进行特异性结合。碱性磷酸酯酶可以催化对硝基苯酸磷酸二钠(PNPP)生成对硝基苯酚。实验通过对对硝基苯酚的氧化峰的测定实现对miRNA-319a的定量检测,传感器对目标序列的响应在0.5-500fM范围内呈良好的线性关系。此外,对不同程度错配的microRNA进行了检测,结果说明此生物传感器有良好的选择性。这种新型的电化学microRNA生物传感器具有高的灵敏度,其线性范围宽,成本低,为RNA的痕量分析提供了一种新的思路。在本实验中提出了一种利用Anti-DNA:RNA抗体的特异性识别能力构建miRNA生物传感器对miRNA进行检测的方法。采用的DNA探针还具有较强的单碱基、三碱基错配和非互补miRNA链的识别能力。设计的电化学miRNA传感器不仅大大提高了灵敏度,同时还大大扩宽了线性范围。另外探针的存在使此传感器具有良好的错配辨别力,实现对完全互补miRNA序列的高灵敏性检测。