【摘 要】
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目的：目前对于内源性类固醇兴奋剂的检测采用同位素比质谱方法.在植物体内,对CO2光合作用途径(C3和C4途径)不同,导致植物中物质的碳同位素比有所不同,C3途径使C同位素的组
【机 构】
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国家体育总局反兴奋剂中心,北京100029
【出 处】
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2012年中国运动生理生化学术会议
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目的：目前对于内源性类固醇兴奋剂的检测采用同位素比质谱方法.在植物体内,对CO2光合作用途径(C3和C4途径)不同,导致植物中物质的碳同位素比有所不同,C3途径使C同位素的组成相对于大气中CO2的C同位素组成产生较大变化,有分流现象.动物对于类固醇激素的代谢是否具有不同途经,即是否存在同位素比分流的情况,尚无文献报道.本研究探讨药物在代谢过程中同位素比是否有分流,明确同位素比质谱分析在兴奋剂检测中的机理.方法：采用体外代谢研究方法,可以排除诸多体内干扰因素的影响,直接观察酶对药物的选择性代谢.本研究中受试药物雄烯二酮的碳同位素比为-35.5‰.采用肝微粒体体外温孵法对雄烯二酮的体外代谢进行了研究,以了解代谢产物的同位素比分流情况.试验中选用大鼠和兔作为肝微粒体酶的来源,制备了肝微粒体,并用工作曲线法测定蛋白溶液的OD值,对肝微粒体的含量进行测定.在肝微粒体溶液(2.5mg/mL)中加入NAPDH溶液,37℃孵育,加入叔丁基甲醚中止反应并提取.代谢物经HPLC纯化：色谱柱Agilent ZORBAX SB-C18(4.6×250mm,5μm)；溶剂A： CH3CN,溶剂B：H2O,30％CH3 CN→100％ CH3CN,18min；流速为1mL/min.收集的组分进行质谱定性分析及同位素比测定.结果：定性分析表明代谢物为睾酮.同位素比实验数据显示,代谢物睾酮同位素比在大鼠与兔之间没有显著性差异.睾酮同位素比为-35.1‰(大鼠)和-34.8‰(兔),与雄烯二酮同位素比无著性差异.结论：化合物的同位素比在动物体外代谢中无明显分流.
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