【摘 要】
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为制备抗牛边缘无浆体MSP5单克隆抗体，以纯化的原核表达的牛重组边缘无浆体MSP5(rMSP5)免疫BALB/c鼠，应用常规杂交瘤技术获得2株能稳定分泌特异性单克隆杭体(MAb)的杂交瘤细胞系(1D8和2F3)。间接ELISA检测腹水效价分别为0.549×106和0.783×105，亚类鉴定结果分别为IgG2b和IgG2a，轻链均为κ型;ELISA叠加试验表明两株MAb识别的抗原位点相同或相近;W
【机 构】
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吉林农业大学动物科技学院,吉林 长春 130118 黑龙江八一农垦大学动物科技学院,大庆 黑龙江 163319
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会
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为制备抗牛边缘无浆体MSP5单克隆抗体，以纯化的原核表达的牛重组边缘无浆体MSP5(rMSP5)免疫BALB/c鼠，应用常规杂交瘤技术获得2株能稳定分泌特异性单克隆杭体(MAb)的杂交瘤细胞系(1D8和2F3)。间接ELISA检测腹水效价分别为0.549×106和0.783×105，亚类鉴定结果分别为IgG2b和IgG2a，轻链均为κ型;ELISA叠加试验表明两株MAb识别的抗原位点相同或相近;Western blot结果显示2株MAb均能与重组表达的MSP5发生反应。特异性抗MSP5的MAb的获得，为进一步用于临床诊断研究奠定了基础。
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为了建立一种方法定量检测禽呼肠孤病毒δNS和δC基因，针对禽呼肠孤病毒δNS、δC基因和管家基因β-actin分别设计了特异性引物，并将PCR扩增的的片段分别连接到pMD18-T载体上，构建的重组质粒分别命名为βactin-pMD18-T、δC-pMD18-T和8NS-pMD18-T。重组质粒经筛选、鉴定纯化后，梯度倍比稀释作为标准品，用于实时定量荧光PCR中禽呼肠孤病毒δNS、δC基因和看家基因
为探索鸡CHIL-18-HN在毕赤酵母中最适宜的表达条件，本试验采用小型摇瓶培养系统，通过对重组毕赤酵母菌X-33/pPICZαACHIL-18-HN在不同诱导时间、培养液pH值、甲醇诱导剂剂量及不同培养温度的条件下表达目的蛋白的分析，以对其表达条件进行优化。结果表明重组菌X-33/pPICZαACHIL-18-HN在pH6.5，甲醇诱导浓度为1.5％，培养诱导温度为30℃的条件下诱导156h，目
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