一株金黄色葡萄球菌噬菌体的分离及其裂解酶的原核表达

来源 :中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第十一次全国学术研讨会暨第五届会员代表大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Play_pig
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  采用对生活污水的浓缩和富集,通过双层平板法,从生活污水中分离纯化得到一株猪源致病性金黄色葡萄球菌的烈性噬菌体,经过测定,该噬菌体最佳感染复数为0.01,效价为109PFU/ml.提取该噬菌体的基因组,尝试通过不同金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶基因引物进行PCR扩增,得到该噬菌体的裂解酶基因,通过对该基因的测序和NCBl Blast比对,确定为噬菌体SA5裂解酶.将该裂解酶基因构建重组原核表达载体PET-32a-SA5,转入表达工程菌BL21中,于25℃、140rpm条件下,1 mol/L ITPG诱导l0h得到可溶性融合重组蛋白trxa-SA5.通过点板法确定其有裂解活性,使用8株临床分离的金黄色葡萄球菌进行抑菌实验,其中四株可被trxa-SA5裂解,其裂解谱比噬菌体SA5宽.在4株金黄色葡萄球菌抑菌实验中,在6μg相同剂量的条件下,重组裂解酶trxa-SA5抑菌圈同万古霉素和氨苄青霉素所产生的抑菌圈大小相近,比四环霉素效果要好.因此,裂解酶SA5可以当作部分金黄色葡萄球菌的抗菌药物.
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会议
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