【摘 要】
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目的:本研究通过分析IIfimA型P.gingivalis的主要毒力因子菌毛蛋白对平滑肌源外泌体作用下内皮细胞生物学行为的影响,探讨P.gingivalis在As发生和发展过程中的可能作用。方法:（1）培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）和人脐动脉平滑肌细胞（HUASMCs）,用PEG提取法提取平滑肌细胞源外泌体（exosomes,Exo）,采用透射电镜分析所提取外泌体的大小,Western bl
【出 处】
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第十一次全国牙周病学学术会议摘要汇编
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目的:本研究通过分析IIfimA型P.gingivalis的主要毒力因子菌毛蛋白对平滑肌源外泌体作用下内皮细胞生物学行为的影响,探讨P.gingivalis在As发生和发展过程中的可能作用。方法:（1）培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）和人脐动脉平滑肌细胞（HUASMCs）,用PEG提取法提取平滑肌细胞源外泌体（exosomes,Exo）,采用透射电镜分析所提取外泌体的大小,Western blot检测外泌体表面标记蛋白CD9和CD63的表达情况;（2）分别给予Exo（100μg/ml）、IIfimA型P.gingivalis-rFimA（10μg/ml）、Exo+rFimA处理HUVECs,以不予任何处理的正常HUVECs为对照组;FACS检测细胞总体凋亡率、存活率及坏死率,RT-PCR检测各组细胞内IL-18及Caspase-3 mRNA的表达情况,ELISA检测各组细胞上清液中IL-18的表达情况,Western blot检测各组细胞内Cleaved caspase-3蛋白表达情况。结果:（1）HUASMCs外泌体提取物经透射电镜观察为圆形或椭圆形外观,直径为30-100nm,WB结果显示外泌体CD9及CD63表达阳性（图1）;（2）FACS结果显示rFimA组和Exo+rFimA组与正常组相比细胞总体凋亡率均升高（P＜0.05）,与rFimA组相比Exo+rFimA组细胞总体凋亡率降低（P＜0.05）（图2）;RT-PCR、Western blot和ELISA结果显示rFimA组和Exo+rFimA组与正常组相比细胞内IL-18mRNA、Caspase-3 mRNA、凋亡主要效应蛋白Cleaved Caspase-3及细胞上清液中IL-18分泌水平均增加（P＜0.05）,与rFimA组相比Exo+rFimA组可部分抑制rFimA作用下HUVECs内IL-18mRNA、Caspase-3 mRNA、Cleaved caspase-3蛋白及细胞上清液中IL-18的表达量（P＜0.05）（图3、图4、图5）。结论:IIfimA型P.gingivalis-rFimA可诱导HUVECs凋亡和炎症因子IL-18的表达,而HUASMCs-Exo虽然可在一定程度上抑制P.gingivalis-rFimA诱导的HUVECs凋亡和炎症反应,仍无法改变HUVECs生物学行为和功能异常的结果。由此推测,IIfim A型P.gingivalis及其毒力因子FimA可能在As发生、发展中发挥一定的作用。
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