【摘 要】
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利用RT-PCR技术,用包含口蹄疫病毒完整VP1基因的引物从猪口蹄疫分离株(O-DG-05)中扩增得到一约1286bp的DNA片段,克隆后,经对该片段的核苷酸序列进行测序和同源性比较,显示其
【机 构】
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广东省农业科学院兽医研究所,广东,广州,510640;吉林大学广东省农业科学院兽医研究所,广东,广州,510640
【出 处】
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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会
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利用RT-PCR技术,用包含口蹄疫病毒完整VP1基因的引物从猪口蹄疫分离株(O-DG-05)中扩增得到一约1286bp的DNA片段,克隆后,经对该片段的核苷酸序列进行测序和同源性比较,显示其与国外同型参考序列(O/JPN/00)的同源性为95.9％,与国内同型参考株(O-Tibet-99)的核苷酸序列的同源性达96.2％.随后以重组质粒pMD-VP1为模板,用特异性表达引物扩增得到目的基因VP1(656bp),对目的基因和表达载体pET28a分别以相同的限制性内切酶酶切后构建成重组表达载体,转化宿主菌BL21(DE3)后得到重组质粒pET-VP1,经酶切及PCR鉴定筛选出阳性克隆,测序证明目的基因正确插入到表达载体.用IPTG诱导VP1基因的表达,收集不同时间的菌液进行SDS-PAGE电泳、Western-blotting分析检测.结果表明,结构蛋白VP1基因可在大肠埃希氏菌中表达,表达产物的分子量约为28kD,并能被猪口蹄疫阳性血清所识别,表达产物有一定的生物学活性.
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