硬骨鱼类生殖细胞减数分裂启动时间与性别控制

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脊椎动物雌性个体生殖细胞进入减数分裂的时间一般早于雄性,因而长期以来,生殖细胞以雌雄个体差异模式进入减数分裂过程的机制,即生殖细胞性别分化的机制,是应用基础研究领域的热点和难点。而在非哺乳类,特别是硬骨鱼类,对生殖细胞进入减数分裂过程调控机制的认识还鲜为人知。已有的研究表明,配子成熟诱导激素(DHP)能够诱导硬骨鱼类配子最终成熟和排卵(精),但其是否在生殖细胞减数分裂启动过程中发挥重要作用需进一步研究。于是,我们在罗非鱼成功克隆了DHP核受体pgr基因,并运用原位杂交技术和qPCR方法检测了pgr基因在罗非鱼性别分化早期的表达模式和细胞定位。另外,我们运用DHP受体拮抗剂(RU486)从孵化后5天开始分别处理基因型为XX和XY的鱼苗,同时也通过雌二醇(E2),11-KT和DHP分别对XX和XY RU486处理组进行回救。在孵化后四个月进行取样分析,通过real-time PCR,免疫组化检测了类固醇合成相关基因,生殖细胞相关基因和体细胞分化关键基因的表达变化。通过EIA检测了雌雄激素合成水平的变化趋势。研究表明DHP和Pgr通路是罗非鱼生殖细胞减数分裂启动过程必不可少的因素,而该通路的阻滞导致XX个体雄性化和雄性个体不育,因此,我们推测鱼类生殖细胞减数分裂启动过程是性别决定和分化的关键,通过对生殖细胞减数分裂过程的调控,可以实现硬骨鱼类性别分化方向的人工控制。
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